【摘 要】
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目的 构建针对NG2基因的小发夹结构RNA(shRNA)真核表达载体,观察该shRNA诱导的RNA干扰(RNAi)对高糖环境下大鼠肾小球系膜细胞(RMC)增殖的影响.方法 体外培养RMC,高糖(30 mmol/L)刺激24 h,观察NG2基因表达的变化.设计两条针对NG2 mRNA不同靶序列的干扰序列,构建针对NG2基因的shRNA表达载体Pgenesil-siNG21和Pgenesil-siNG
【机 构】
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430022,武汉,华中科技大学同济医学院附属协和医院肾内科,430022,武汉,华中科技大学同济医学院附属协和医院急诊科,430022,武汉,华中科技大学同济医学院附属协和医院肾内科,430022,
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目的 构建针对NG2基因的小发夹结构RNA(shRNA)真核表达载体,观察该shRNA诱导的RNA干扰(RNAi)对高糖环境下大鼠肾小球系膜细胞(RMC)增殖的影响.方法 体外培养RMC,高糖(30 mmol/L)刺激24 h,观察NG2基因表达的变化.设计两条针对NG2 mRNA不同靶序列的干扰序列,构建针对NG2基因的shRNA表达载体Pgenesil-siNG21和Pgenesil-siNG22:选择不与任何基因同源的序列NC作为阴性对照.运用脂质体将3种质粒分别转染RMC,24 h后荧光倒置显微镜观察转染效率,即增强绿色荧光蛋白(EGFP)表达率,荧光定量PCR法和Western印迹法观察NG2的干扰效率.以高糖刺激转染的RMC,用四甲基偶氮唑蓝比色法(MYT)和流式细胞仪(FCM)检测RMC增殖的变化.结果 与低糖和甘露醇对照组比较,高糖刺激RMC后NG2表达水平明显升高,分别增高(65±32)%和(63±28)%,差异有统计学意义(P＜0.01).质粒转染RMC 24 h后,EGFP的表达率为(50±10)%.高糖刺激后,干扰质粒转染组RMC增殖缓慢,与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.01).结论 针对NG2基因的shRNA对高糖诱导的RMC增殖有明显的抑制作用。
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