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摘 要：目的：建立了复方鲜竹沥口服液的质量标准。方法：采用薄层色谱法对鱼腥草、桔梗进行定性鉴别，采用HPLC测定枇杷叶中熊果酸的含量。结果：薄层色谱法能准确鉴别鱼腥草、桔梗，HPLC能准确测定熊果酸的含量，测得熊果酸的线性范围为2.04～40.84μg·mL-1，R=0.9999；平均回收率为99.32%，RSD（%）=0.58%。结论：该方法准确、可行，可作为复方鲜竹沥口服液的质量标准。
关键词：复方鲜竹沥口服液；熊果酸；薄层色谱法；HPLC
复方鲜竹沥口服液为祛痰剂，具有清热化痰，止咳之功效，主治痰热咳嗽，痰黄黏稠。由鲜竹沥、鱼腥草、枇杷叶、桔梗、半夏、生姜、薄荷油加工而成的中药复方口服液。为了更好的控制本品质量，建立了復方鲜竹沥口服液的质量标准研究，采用薄层色谱法对鱼腥草、桔梗进行定性鉴别，采用HPLC法测定枇杷叶中熊果酸的含量。
1 仪器、试药及样品
高效液相色谱仪（岛津Nexera XR）；迪马C18（250×4.6mm，5μm）色谱柱；熊果酸对照品（中检所，批号：110742-201220），甲基正壬酮对照品、桔梗对照药材（中检所）；乙腈为色谱纯，水为纯净水，其它试剂均为分析纯；复方鲜竹沥口服液（市售样品，规格：10ml*10支）。
2 薄层鉴别
薄层鉴别 结合本产品特点，参照药典，建立了鱼腥草、桔梗、半夏药材的薄层定性鉴别方法。
2.1 鱼腥草鉴别。取本品200ml，置圆底烧瓶中，加水100ml，连接挥发油测定器。自测定器上端加水使充满刻度部分，再加醋酸乙酯1ml，连接回流冷凝管，加热回流1小时，停止加热，放置片刻，分取醋酸乙酯层，作为供试品溶液。另取甲基正壬酮对照品，加醋酸乙酯制成每1ml含10μg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法试验，吸取上述供试品溶液10μl，对照品溶液5μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以正己烷-醋酸乙酯（8：2）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以二硝基苯肼试液，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的黄色斑点。
2.2 桔梗鉴别。取本品10ml，加7%硫酸乙醇-水（1：3）混合溶液10ml，加热回流30分钟，放冷，用三氯甲烷振摇提取2次，每次20m1，合并三氯甲烷液，加水洗涤2次，每次30ml，弃去洗液，三氯甲烷液用无水硫酸钠脱水，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取桔梗对照药材1g，加7%硫酸乙醇-水（1：3）混合溶液20ml，加热回流2小时，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-乙醚（2：1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
2.3 专属性试验。分别取不含鱼腥草的阴性样品、不含桔梗的阴性样品，按上述各自方法制成阴性样品供试品溶液。结果在与甲基正壬酮对照品色谱相应的位置上，鱼腥草阴性样品不显相同的黄色斑点。在与桔梗对照药材色谱相应的位置上，不含桔梗的阴性样品不显相同颜色的斑点。本品其他成分不干扰鱼腥草、桔梗的定性鉴别，专属性良好。
3 含量测定 建立了HPLC法测定本品中枇杷叶主要有效成分熊果酸含量方法
3.1 色谱条件。以十八烷基砝烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-甲醇-0.5%醋酸铵溶液（65：15：20）为流动相；柱温35℃；进样量20μl；检测波长为210nm。理论板数按熊果酸峰计算应不低于5000。
3.2 对照品溶液的制备。取熊果酸对照品适量，精密称定，加95%乙醇制成每1ml含熊果酸20μg的溶液，即得。
3.3 供试品溶液的制备。精密取本品5ml，置50ml量瓶中，加入95%乙醇适量，超声处理（功率250W，频率50kHz）10分钟，放冷，加95%乙醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
3.4 专属性试验。按处方比例制备不含枇杷叶的阴性样品，按供试品方法制备阴性样品溶液，结果表明，阴性样品溶液在熊果酸色谱峰处无干扰峰，方法专属性良好。
3.5 线性关系考察。精密称取熊果酸对照品10.21mg，置50ml量瓶中，加95%乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品原液。精密量取对照品原液0.1、0.5、1.0、1.5、2.0ml，分别置10ml量瓶中，加95%乙醇稀释至刻度，摇匀，作为不同浓度的对照品溶液。照含量测定法，精密量取20μl，注入高效液相色谱仪，记录色谱图，以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标作线性回归，详见表1。
结果表明，熊果酸在浓度为2.04～40.84μg·mL-1的范围内线性关系良好。
3.6 重复性试验。取同一批号样品，平行测定6次，计算含量，考察含量结果的相对标准偏差，结果符合规定，重复性良好，详见表2。
3.7 准确度试验。精密称取熊果酸对照品10.14mg，加95%乙醇溶解并稀释至刻度，作为对照品原液。精密量取本品2.5ml，共9份，置50ml量瓶中，分别精密加入对照品原液2.0、2.5、3.0ml（每个浓度3份），加入95%乙醇适量，超声处理（功率250W，频率50kHz）10分钟，放冷，加95%乙醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，作为回收率供试品溶液。同法配制对照品溶液。精密量取供试品及对照品溶液各20μl，注入高效液相色谱仪，记录峰面积，以外标法计算熊果酸的回收率，详见表3。
结果表明，熊果酸在高、中、低3个浓度下的回收率均在98%-102%，RSD小于2.0%，说明本方法准确度良好。
3.8 样品测定 用已建立的熊果酸含量测定方法测定3个不同批号的市售样品，详见表4。
结果表明，3个不同批次的样品含量测定结果均符合规定，且批次间熊果酸含量无明显差异，含量均一。
4 结论
经过方法学验证试验表明，建立的薄层色谱法和高效液相色谱法，可用于本产品的质量控制。
5 讨论
5.1 鱼腥草的主要成分为挥发油，油中主要为甲基壬酮，所以对鱼腥草药材主要定性鉴别甲基壬酮。药典中展开剂为正己烷-醋酸乙酯（9：1），而本品采用此展开剂比移值（Rf=0.2）较小，分离效果不佳，经过实验摸索，采用正己烷-醋酸乙酯（8：2）比例，比移值符合规定（Rf=0.5），分离效果好，斑点清晰。
5.2 枇杷叶中熊果酸的流动相系统采用乙腈-甲醇-0.5%醋酸铵溶液（65：15：20），熊果酸色谱峰与相邻色谱峰达到良好分离，峰形柱效均符合规定。由于本产品成分较多，采用药典枇杷叶药材熊果酸流动相乙腈-甲醇-0.5%醋酸铵溶液（67：12：21），与相邻一个色谱峰未完全分开，所以减少乙腈量，延后保留时间，达到完全分离。
参考文献
[1]中华人民共和国药典（一部）.化学工业出版社，2015：224.
[2]中华人民共和国药典（一部）.化学工业出版社，2015：227.
[3]中华人民共和国药典（一部）.化学工业出版社，2015：204-205.
关键词：复方鲜竹沥口服液；熊果酸；薄层色谱法；HPLC
复方鲜竹沥口服液为祛痰剂，具有清热化痰，止咳之功效，主治痰热咳嗽，痰黄黏稠。由鲜竹沥、鱼腥草、枇杷叶、桔梗、半夏、生姜、薄荷油加工而成的中药复方口服液。为了更好的控制本品质量，建立了復方鲜竹沥口服液的质量标准研究，采用薄层色谱法对鱼腥草、桔梗进行定性鉴别，采用HPLC法测定枇杷叶中熊果酸的含量。
1 仪器、试药及样品
高效液相色谱仪（岛津Nexera XR）；迪马C18（250×4.6mm，5μm）色谱柱；熊果酸对照品（中检所，批号：110742-201220），甲基正壬酮对照品、桔梗对照药材（中检所）；乙腈为色谱纯，水为纯净水，其它试剂均为分析纯；复方鲜竹沥口服液（市售样品，规格：10ml*10支）。
2 薄层鉴别
薄层鉴别 结合本产品特点，参照药典，建立了鱼腥草、桔梗、半夏药材的薄层定性鉴别方法。
2.1 鱼腥草鉴别。取本品200ml，置圆底烧瓶中，加水100ml，连接挥发油测定器。自测定器上端加水使充满刻度部分，再加醋酸乙酯1ml，连接回流冷凝管，加热回流1小时，停止加热，放置片刻，分取醋酸乙酯层，作为供试品溶液。另取甲基正壬酮对照品，加醋酸乙酯制成每1ml含10μg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法试验，吸取上述供试品溶液10μl，对照品溶液5μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以正己烷-醋酸乙酯（8：2）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以二硝基苯肼试液，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的黄色斑点。
2.2 桔梗鉴别。取本品10ml，加7%硫酸乙醇-水（1：3）混合溶液10ml，加热回流30分钟，放冷，用三氯甲烷振摇提取2次，每次20m1，合并三氯甲烷液，加水洗涤2次，每次30ml，弃去洗液，三氯甲烷液用无水硫酸钠脱水，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取桔梗对照药材1g，加7%硫酸乙醇-水（1：3）混合溶液20ml，加热回流2小时，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-乙醚（2：1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
2.3 专属性试验。分别取不含鱼腥草的阴性样品、不含桔梗的阴性样品，按上述各自方法制成阴性样品供试品溶液。结果在与甲基正壬酮对照品色谱相应的位置上，鱼腥草阴性样品不显相同的黄色斑点。在与桔梗对照药材色谱相应的位置上，不含桔梗的阴性样品不显相同颜色的斑点。本品其他成分不干扰鱼腥草、桔梗的定性鉴别，专属性良好。
3 含量测定 建立了HPLC法测定本品中枇杷叶主要有效成分熊果酸含量方法
3.1 色谱条件。以十八烷基砝烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-甲醇-0.5%醋酸铵溶液（65：15：20）为流动相；柱温35℃；进样量20μl；检测波长为210nm。理论板数按熊果酸峰计算应不低于5000。
3.2 对照品溶液的制备。取熊果酸对照品适量，精密称定，加95%乙醇制成每1ml含熊果酸20μg的溶液，即得。
3.3 供试品溶液的制备。精密取本品5ml，置50ml量瓶中，加入95%乙醇适量，超声处理（功率250W，频率50kHz）10分钟，放冷，加95%乙醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
3.4 专属性试验。按处方比例制备不含枇杷叶的阴性样品，按供试品方法制备阴性样品溶液，结果表明，阴性样品溶液在熊果酸色谱峰处无干扰峰，方法专属性良好。
3.5 线性关系考察。精密称取熊果酸对照品10.21mg，置50ml量瓶中，加95%乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品原液。精密量取对照品原液0.1、0.5、1.0、1.5、2.0ml，分别置10ml量瓶中，加95%乙醇稀释至刻度，摇匀，作为不同浓度的对照品溶液。照含量测定法，精密量取20μl，注入高效液相色谱仪，记录色谱图，以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标作线性回归，详见表1。
结果表明，熊果酸在浓度为2.04～40.84μg·mL-1的范围内线性关系良好。
3.6 重复性试验。取同一批号样品，平行测定6次，计算含量，考察含量结果的相对标准偏差，结果符合规定，重复性良好，详见表2。
3.7 准确度试验。精密称取熊果酸对照品10.14mg，加95%乙醇溶解并稀释至刻度，作为对照品原液。精密量取本品2.5ml，共9份，置50ml量瓶中，分别精密加入对照品原液2.0、2.5、3.0ml（每个浓度3份），加入95%乙醇适量，超声处理（功率250W，频率50kHz）10分钟，放冷，加95%乙醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，作为回收率供试品溶液。同法配制对照品溶液。精密量取供试品及对照品溶液各20μl，注入高效液相色谱仪，记录峰面积，以外标法计算熊果酸的回收率，详见表3。
结果表明，熊果酸在高、中、低3个浓度下的回收率均在98%-102%，RSD小于2.0%，说明本方法准确度良好。
3.8 样品测定 用已建立的熊果酸含量测定方法测定3个不同批号的市售样品，详见表4。
结果表明，3个不同批次的样品含量测定结果均符合规定，且批次间熊果酸含量无明显差异，含量均一。
4 结论
经过方法学验证试验表明，建立的薄层色谱法和高效液相色谱法，可用于本产品的质量控制。
5 讨论
5.1 鱼腥草的主要成分为挥发油，油中主要为甲基壬酮，所以对鱼腥草药材主要定性鉴别甲基壬酮。药典中展开剂为正己烷-醋酸乙酯（9：1），而本品采用此展开剂比移值（Rf=0.2）较小，分离效果不佳，经过实验摸索，采用正己烷-醋酸乙酯（8：2）比例，比移值符合规定（Rf=0.5），分离效果好，斑点清晰。
5.2 枇杷叶中熊果酸的流动相系统采用乙腈-甲醇-0.5%醋酸铵溶液（65：15：20），熊果酸色谱峰与相邻色谱峰达到良好分离，峰形柱效均符合规定。由于本产品成分较多，采用药典枇杷叶药材熊果酸流动相乙腈-甲醇-0.5%醋酸铵溶液（67：12：21），与相邻一个色谱峰未完全分开，所以减少乙腈量，延后保留时间，达到完全分离。
参考文献
[1]中华人民共和国药典（一部）.化学工业出版社，2015：224.
[2]中华人民共和国药典（一部）.化学工业出版社，2015：227.
[3]中华人民共和国药典（一部）.化学工业出版社，2015：204-205.