【摘 要】
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目的 观察Uromodulin基因启动子在各种真核细胞中表达的特异性及活性.方法 对含Uromodulin基因启动子的真核表达质粒pEGFP-URO进行测序鉴定,利用脂质体转染技术,将质粒转染人
【机 构】
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华中科技大学同济医学院附属协和医院泌尿外科
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目的 观察Uromodulin基因启动子在各种真核细胞中表达的特异性及活性.方法 对含Uromodulin基因启动子的真核表达质粒pEGFP-URO进行测序鉴定,利用脂质体转染技术,将质粒转染人近端肾小管上皮细胞株(HK-2)、人肾癌细胞株(ACHN)、人膀胱癌细胞株(T24)、大鼠系膜细胞株(HBZY-1),用荧光显微镜和流式细胞仪观察绿色荧光蛋白(EGFP)的表达.经激发光照射后发出绿色荧光的为阳性细胞,并和pEGFP-N3进行对照研究.结果 转染24 h后HK-2、ACHN阳性率较高(7～12/HP),流式检测结果为13.2%和11.4%;而T24、HBZY-1阳性率较低(0～1/HP),流式检测结果为0%和0.8%.pEGFP-N3在各组细胞中均有较高表达,其阳性率分别为23.08%(HK-2)、19.24%(ACHN)、26.14%(T24)和18.03%(HBZY-1).结论 小鼠Uromodulin基因启动子在HK-2及ACHN中具有特异性的启动活性,其活性约为CMV的50%.
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