【摘 要】
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为获得草鱼肝胰脏的碱性磷酸酶,并阐明其性质,利用Tris-HCl(pH 7.5)缓冲液抽提、正丁醇脱脂、硫酸铵分级沉淀分离和葡聚糖凝胶(Sephadex G-150)等步骤对草鱼肝胰脏碱性磷酸酶
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为获得草鱼肝胰脏的碱性磷酸酶,并阐明其性质,利用Tris-HCl(pH 7.5)缓冲液抽提、正丁醇脱脂、硫酸铵分级沉淀分离和葡聚糖凝胶(Sephadex G-150)等步骤对草鱼肝胰脏碱性磷酸酶进行分离纯化,测定碱性磷酸酶的动力学性质,研究金属离子对碱性磷酸酶活力的影响。试验结果表明,得到提取倍数为7.3倍、比活力为949.8U/mg的碱性磷酸酶,酶液经SDS-PAGE呈一条带,其亚基的分子量约54ku。动力学测定结果显示,该酶催化对硝基磷酸苯二钠水解反应的最适pH为10.33,最适温度为38℃,米氏常数为9.03mmol/L,最大反应速度为1.5μmol/(L·min)。Li+、Na+、K+对碱性磷酸酶活力影响不大;Ba2+、Ca2+、Mg2+、Mn2+能激活碱性磷酸酶活力;EDTA、Cu2+和Zn2+抑制碱性磷酸酶活力。研究结果可为碱性磷酸酶在鱼类脂质代谢中的作用提供参考和依据。
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