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研究阻断肝细胞中RIPK3(receptor-interacting protein kinase 3)诱导的坏死性凋亡对小鼠肝脏缺血再灌注损伤(IRI)的影响。
方法60只小鼠采用Stata统计软件随机分为4组：野生型(WT)对照组、肝特异性敲除RIPK3(HKO)对照组、WT-IRI组，HKO-IRI组。对照组进行假手术，即开腹后仅游离肝门部血管，不阻断血流，WT-IRI组和HKO-IRI组开腹后游离肝门血管并阻断肝左叶和肝中叶的血供90 min，然后开放血管6 h，取各组小鼠的血液和肝组织样本，检测肝功能，免疫组织化学及HE染色检测炎症浸润及肝损伤，蛋白质印迹法检测自噬相关蛋白LC3-Ⅱ、P62。并提取WT小鼠和HKO小鼠原代肝细胞，分为对照组和缺氧复氧组(HIR组)。贴壁后HIR组缺氧4 h，复氧4 h，取上清液检测ALT、AST，细胞提取蛋白检测LC3-Ⅱ、P62。
结果与对照组相比，IRI组小鼠肝组织明显受损，但是与WT-IRI组相比，HKO-IRI组肝损伤显著加重(P<0.05)，进一步研究发现其肝组织中LC3-Ⅱ蛋白含量明显下降，P62蛋白含量增加。同样，肝细胞缺氧复氧后，相对于WT鼠，HKO来源的肝细胞损伤也更重。
结论RIPK3敲除阻断肝细胞坏死性凋亡后，通过抑制自噬加重了肝IRI。