葡聚糖酶基因在大肠杆菌中的表达优化

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拟青霉(Paecilomyces sp.FLH30)β-1,3(4)-葡聚糖酶可在重组菌BL21(DE3)-pET28a/PsBg16A中表达.首先确定了该酶的细胞表达定位,再研究了诱导温度、诱导剂种类及浓度、诱导起始菌体密度、诱导时间等因素对重组菌生长及目的蛋白表达活性的影响.结果表明,IPTG和乳糖皆可诱导目的蛋白表达,乳糖的诱导效果优于IPTG.在诱导起始OD_(600)为3.2时加入10%乳糖,20℃诱导20 h最适于目的蛋白的表达.表达条件优化后,酶活可达到482.2U/mL.
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