人脐带血CD34^+细胞的提取及慢病毒载体转染的初步研究

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目的探讨人脐带血CD34^+细胞提取以及慢病毒转染的方法。方法脐带血20袋,采用直接梯度离心法,或6%羟乙基淀粉沉淀加梯度离心法收集单个核细胞,检测CD34^+阳性率,经MACS磁珠分离获得CD34^+细胞,分为完全培养基组、增强感染剂(ENis)组,过夜培养,每组按MOI 1:1、1:10、1:50加入带GFP标记的慢病毒载体进行转染,每小组再分组分别加入0、1、5ng/mL polybrene,转染后36~48h,3、5、7d分别在荧光显微镜下观察转染情况。结果直接梯度法获得的单个核细胞中红细胞含量高
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