【摘 要】
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为了实现重组蛋白SRT-ELP36在大肠杆菌中的高效表达，利用携带重组蛋白SRTELP36基因的pET-25b（+）表达载体，分别在摇瓶和5 L发酵罐上进行了发酵条件优化，并在50 L发酵罐中进行放大验证。经转化表达质粒后，宿主菌BL21（DE3）的菌体生长和蛋白体积产量均高于BLR（DE3），可用于SRT-ELP36表达。摇瓶发酵条件优化结果表明，TB培养基、装液比5%、诱导温度为37℃、对数生
【机 构】
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华东理工大学生物工程学院生物反应器工程国家重点实验室
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为了实现重组蛋白SRT-ELP36在大肠杆菌中的高效表达，利用携带重组蛋白SRTELP36基因的pET-25b（+）表达载体，分别在摇瓶和5 L发酵罐上进行了发酵条件优化，并在50 L发酵罐中进行放大验证。经转化表达质粒后，宿主菌BL21（DE3）的菌体生长和蛋白体积产量均高于BLR（DE3），可用于SRT-ELP36表达。摇瓶发酵条件优化结果表明，TB培养基、装液比5%、诱导温度为37℃、对数生长结束期添加0.5 mmol/L的IPTG诱导剂，菌体最高OD600可达到22.3，最高蛋白体积产量达0.60 g/L。进一步在5 L发酵罐中进行补料分批培养条件优化，在OD600为35时添加终浓度为0.5 mmol/L的IPTG启动诱导，并控制过程菌体氧消耗速率（OUR）为（180±5） mmol/L/h，菌体的最高OD600和蛋白体积产量分别达到了88 g/L和1.85 g/L，单位菌体产量为70 mg/g。在50 L发酵罐中，参照5 L工艺控制条件进行发酵过程放大，菌体最高OD600达到了103，重组蛋白SRT-ELP36的体积产量和单位菌体产量进一步提高到了2.22 g/L和90 mg/g，是目前文献报道SRT蛋白表达的最高水平，为高性能融合鱿鱼环齿-类弹性蛋白的工业化生产提供了基础。
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