【摘 要】
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目的以基因工程酵母表达的胞内D-氨基酸氧化酶(DAAO)为原料,通过破细胞,分离纯化DAAO.方法采用机械研磨,反复冻溶,超声波等多种方法破细胞,获得粗酶液,硫酸铵分段沉淀.沉淀透
【机 构】
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复旦大学药学院生物合成药物化学教研室,浙江大学生命科学院生物技术系,中国科学院上海生命科学院生物化学与细胞生物学研究所
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目的以基因工程酵母表达的胞内D-氨基酸氧化酶(DAAO)为原料,通过破细胞,分离纯化DAAO.方法采用机械研磨,反复冻溶,超声波等多种方法破细胞,获得粗酶液,硫酸铵分段沉淀.沉淀透析后,经DEAESephadex A-50,DEAE-DE52,Q-sepharose等离子交换柱进行第一步分离,获得的含酶粗品,再经SephacrylS-100分子筛进一步纯化获得电泳纯的DAAO.结果超声波破壁为最佳的破壁方法,得到的每毫升酶液所含的酶活力是其他破壁方法的两倍以上,最高达到12 000 U/mL.两步硫酸铵沉
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