【摘 要】
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目的制备着丝粒相关蛋白E (CENP-E）的兔源特异性多克隆抗体。方法应用分子克隆技术构建原核细胞表达质粒pHis-CENPEC410，并将其转化至表达菌株BL-21(DE3）感受态细胞中；然后用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷（IPTG）诱导表达His-CENPEC410融合蛋白，再用Ni-NTA镍离子金属螯合树脂柱亲和层析法进行纯化；最后将纯化后的蛋白作为抗原免疫新西兰大白兔，制备特异性CENP-
【机 构】
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100021 北京，中国医学科学院北京协和医学院肿瘤医院,300387 天津师范大学生命科学学院,300387 天津师范大学生命科学学院
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目的制备着丝粒相关蛋白E (CENP-E）的兔源特异性多克隆抗体。
方法应用分子克隆技术构建原核细胞表达质粒pHis-CENPEC410，并将其转化至表达菌株BL-21(DE3）感受态细胞中；然后用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷（IPTG）诱导表达His-CENPEC410融合蛋白，再用Ni-NTA镍离子金属螯合树脂柱亲和层析法进行纯化；最后将纯化后的蛋白作为抗原免疫新西兰大白兔，制备特异性CENP-E多克隆抗体，分别用免疫印迹法和免疫共沉淀法对免疫抗体血清进行检测，用免疫荧光染色法检测纯化的抗体。
结果制备的抗体血清可较好地应用于免疫印迹和免疫共沉淀实验，纯化的抗体可用于免疫荧光染色。
结论获得了具有较高特异性和灵敏度的CENP-E多克隆抗体，为后续CENP-E蛋白的研究奠定了基础。
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