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为提高Ｌ－天冬酰胺酶Ⅱ基因工程菌Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ ｐＫＡ／ＣＰＵ２１０００９的产酶量，采用正交试验法确定了较佳培养条件，并优化了发酵工艺。工程菌摇产酶稳定在１９８Ｕ／ｍｌ。２５Ｌ发酵罐产酶亦高达１８０Ｕ／ｍｌ，发酵周期大大缩短，仅９～１０小时。产酶量比原部以上，具有较好的工业生产前景。