【摘 要】
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目的 构建人类8型疱疹病毒(HHV-8)基因开放读码框(ORF)73C重组原核表达质粒并诱导表达,获得HHV-8潜伏态相关核抗原重组蛋白,并对其免疫活性进行初步鉴定.方法 软件设计引物,
【机 构】
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乌鲁木齐,美国芝加哥大学伊利诺斯医学院免疫与微生物系病毒中心实验室
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目的 构建人类8型疱疹病毒(HHV-8)基因开放读码框(ORF)73C重组原核表达质粒并诱导表达,获得HHV-8潜伏态相关核抗原重组蛋白,并对其免疫活性进行初步鉴定.方法 软件设计引物,分别在引物两端添加特异的酶切位点,以pGEM-Teasy/ORF73质粒为模板,聚合酶链反应(PCR)扩增ORF73C基因序列,克隆入原核表达载体pET-28a(+),构建原核表达质粒pET28a-ORF73C;转化E.coli DH5α,经酶切、测序鉴定其插入序列的正确性,转入E.coli BL21(DE3),并诱导表达,以多聚组氨酸亲合层析柱纯化,凝胶蛋白电泳、Western印迹方法行表达蛋白的分析和抗原特异性免疫鉴定.结果 测序结果表明构建的pET28a-ORF73C原核表达质粒连接正确,插入的ORF73C基因片段为453 bp.十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)表明ORF73C基因成功表达,在相对分子质量20 000处有表达条带Western印迹分析显示重组蛋白能被卡波济肉瘤患者阳性血清识别,具有良好的抗原性.结论 成功构建了pET28a-ORF73C原核表达质粒,获得的纯化HHV-8潜伏态相关核抗原蛋白与卡波济肉瘤患者血清具有特异性识别,显示其作为检测抗原的可能,但其敏感性和特异性则有待进一步的验证.
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