目的　建立超广谱 β内酰胺酶 (ESBLs)多重聚合酶链反应 (multiplexPCR)的检测方法并对其进行应用评价。方法　通过排序比较选择TEM、SHV和CTX M型基因编码区保守序列设计型特异性通用引物 ,建立多重PCR体系 ,对产ESBLs标准株及 5 4个疑产ESBLs临床分离株进行ESBLs的检测 ,并通过PCR产物克隆测序及美国临床实验室标准化委员会表型确认试验的平行检测 ,对该法进行应用评价。结果　多重PCR法对纸片法阳性株及阴性株ESBLs检出率分别为 94 3% (33/ 35 )和2 6 3% (5 / 19) ;测序结果证实了该法的特异性 ,且敏感性较高。 84 2 % (32 / 38)ESBLs基因型为CTX M型 ,15 8% (6 / 38)为SHV型。结论　该法的建立为临床检测ESBLs及其分子流行病学研究提供了一种特异和敏感的工具。