【摘 要】
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目的通过优化玻璃珠破碎法的条件,制备最具活性的重组人CYP2C9酵母微粒体,从而为建立更加灵敏快捷的体外代谢筛选模型提供依据。方法利用玻璃珠破碎的方法,制备重组人CYP2C9
【机 构】
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中国药科大学基础医学与临床药学学院,南京珼瑞斯生物医药科技有限公司,日本藤川株式会社
【基金项目】
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江苏省"双创计划"(国外院士类)项目(苏人才办[2014]155号).
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目的通过优化玻璃珠破碎法的条件,制备最具活性的重组人CYP2C9酵母微粒体,从而为建立更加灵敏快捷的体外代谢筛选模型提供依据。方法利用玻璃珠破碎的方法,制备重组人CYP2C9酵母微粒体。通过改变涡旋振荡次数和玻璃珠用量,优化制备微粒体的条件。用Lowry法测定微粒体中的蛋白含量,用CYP2C9的典型底物双氯芬酸与微粒体进行反应,以单位时间(h)内单位蛋白(mg/ml)所对应的双氯芬酸代谢物4-羟基双氯芬酸的生成量来确定微粒体的蛋白活性。结果随着涡旋振荡次数和玻璃珠用量的增加,所制备微粒体蛋白的含量增加。当
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