【摘 要】
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目的:构建人端粒酶逆转录酶(hTERT)启动子调控的趋化因子受体4(CXCR4)的RNA干扰逆转录病毒载体,并研究其在hTERT+前列腺癌细胞、乳腺癌细胞中的表达.方法:用PCR扩增CXCR4特异
【机 构】
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华中科技大学同济医学院协和医院泌尿外科,西安交通大学第二医院泌尿外科
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目的:构建人端粒酶逆转录酶(hTERT)启动子调控的趋化因子受体4(CXCR4)的RNA干扰逆转录病毒载体,并研究其在hTERT+前列腺癌细胞、乳腺癌细胞中的表达.方法:用PCR扩增CXCR4特异性小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA),转入带有增强型绿色荧光蛋白(EGFP)和启动子U6的Pgensil-1质粒,以hTERT启动子代替U6启动子,再将重组基因片段导入到逆转录病毒真核表达载体PLXSN中,行限制性酶切鉴定.转染PA317病毒包装细胞,收获病毒上清分别转染前列腺癌细胞PC-3m、LNCaP及人胚肺成纤维细胞MRC5和人乳腺癌细胞MCF7,RT-PCR检测CXCR4 mRNA表达.结果:限制性酶切鉴定该重组质粒,成功构建了PLXSN/EGFP-hTERT-siCXCR4.与空载体组比较,PC-3m、LNCaP、MCF7细胞中CXCR4-siRNA对CXCR4 mRNA的48 h抑制率分别为(87.02±10.34)%、(61.70±9.77)%、(88.31±9.20)%.MRC5细胞中PLXSN-hTERT-siCXCR4对CXCR4 mRNA不抑制.结论:该逆转录病毒系统中hTERT启动子调控的下游RNA干扰序列可选择性地在hTERT+前列腺癌细胞、乳腺癌细胞中表达,在hTERTMRC5细胞不表达,具有显著的靶向性.
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