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摘要：目的 建立通便茶的质量控制方法。方法 采用薄层色谱法对通便茶中的大黄、黄芩、枳壳进行定性鉴别，采用高效液相色谱法测定制剂中大黄素、大黄酸的含量。色谱柱为SunFire C18（4.6 mm×250 mm，5 ?m），流动相为甲醇-0.1%磷酸溶液（85∶15），检测波长254 nm，流速1.0 mL/min，柱温30 ℃。结果 薄层色谱鉴别方法专属性强。大黄素在0.448～1.344 μg范围内线性关系良好，r=0.999 7；大黄酸在0.011～0.077 μg范围内线性关系良好，r=0.999 8。大黄素和大黄酸加样回收率分别为98.52%、97.53%，RSD分别为1.02%、1.15%（n=6）。结论 该方法可行，结果准确，重复性好，可有效控制通便茶的质量。
关键词：通便茶；质量标准；薄层色谱法；高效液相色谱法；大黄素；大黄酸
中图分类号：R284.1 文献标识码：A 文章编号：1005-5304（2013）10-0051-03
通便茶为本院研制的纯中药袋泡剂，由大黄、黄芩、枳壳、甘草等组成，具有缓泻通便作用，用于肠胃燥热致大便秘结等症。为有效控制该制剂的质量，笔者采用薄层色谱法对通便茶中所含主要成分大黄、黄芩、枳壳进行定性鉴别，采用高效液相色谱法（HPLC）测定制剂中大黄素、大黄酸的含量，现报道如下。
1 仪器与试药
Waters2695高效液相色谱仪，Waters2998二极管阵列检测器（美国Waters）；分析天平（Shimadzu Aux220，日本岛津）；超声波清洗器（SCQ-250，上海声浦超声波设备厂）；硅胶G板（青岛海洋化工厂分厂）；玻璃点样毛细管（华西医科大学仪器厂）。
大黄、黄芩、枳壳对照药材（批号分别为120902-200408、120955-200010、121008-200505，中国药品生物制品检定所）；大黄素、大黄酸、黄芩苷、柚皮苷对照品（批号分别为110756- 200110、110757-200206、110715-201011、110722-200610，中国药品生物制品检定所）；通便茶（批号分别为20130329、20130330、20130401、20130402、20130403、20130404、20130405、20130406、20130408、20130409，本院制剂室制备）；甲醇为色谱纯，其余试剂均为分析纯。
2 薄层鉴别
2.1 大黄
取本品粉末0.2 g，加甲醇2 mL，超声处理（功率180 W，频率38 kHz）1 h，滤过，滤液蒸干，然后加甲醇1 mL使溶解，作为供试品溶液。另取大黄对照药材0.1 g，加甲醇20 mL，同法制成对照药材溶液。再取大黄素对照品，加甲醇制成1 mg/mL的溶液，作为对照品溶液。按处方量取除大黄外其余药味，按工艺要求制成缺大黄的样品，按供试品溶液制备方法，制备阴性对照溶液。照薄层色谱法[2010年版《中华人民共和国药典》（一部）附录ⅥB]试验，吸取上述溶液各5 ?L，分别点于同一硅胶G薄层板上。以水饱和的苯-甲酸乙酯-甲酸-甲醇（3∶3∶1∶1）为展开剂展开，展距10 cm，置紫外灯（365 nm）下检视。供试品色谱中，与对照品和对照药材色谱相应位置上可见橙红色荧光斑点，置氨气中熏蒸后，日光下检视，斑点变为红色。阴性对照无干扰。
2.2 黄芩
取本品粉末0.2 g，加甲醇2 mL，超声处理（功率180 W，频率38 kHz）1 h，滤过，滤液蒸干，然后加甲醇1 mL使溶解，作为供试品溶液。取黄芩对照药材5 g、黄芩阴性对照样品10 g，同法制成对照药材溶液和阴性对照溶液。再取黄芩苷对照品加甲醇制成0.1 mg/mL的对照品溶液。照薄层色谱法[2010年版《中华人民共和国药典》（一部）附录ⅥB]试验，吸取上述溶液各5 ?L，分别点于同一硅胶G薄层板上。以乙酸乙酯-丁酮-乙酸-水（10∶7∶2∶2）为展开剂，展开，取出，吹干，喷以2%三氯化铁乙醇液。供试品色谱中，与对照品色谱相应位置上显相同的墨绿色斑点，与对照药材色谱相应位置上显相同颜色的斑点，阴性对照无相应斑点。
2.3 枳壳
取本品5 g，加甲醇25 mL，超声处理（功率180 W，频率38 kHz） 1 h，滤过，滤液蒸干，残渣加10 mL水，用乙醚振摇提取3次，每次15 mL，弃去乙醚液，蒸馏回收乙醚，再用乙酸乙酯振摇提取3次，每次20 mL，合并乙酸乙酯液（水层备用），蒸干，残渣加甲醇1 mL使溶解，作为供试品溶液。另取枳壳对照药材0.5 g，加甲醇20 mL，同法制成对照药材溶液。再取柚皮苷对照品，加甲醇制成1 mg/mL的对照品溶液。按处方量取除枳壳外其余药味，按工艺要求制成缺枳壳的样品，按供试品溶液制备方法，制备阴性对照溶液。照薄层色谱法[2010年版《中华人民共和国药典》（一部）附录ⅥB]试验，吸取上述4种溶液各5 ?L，分别点于同一硅胶G薄层板上。以三氯甲烷-甲醇-冰醋酸（10∶2∶0.1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1%三氯化铝乙醇溶液。供试品色谱中，在与对照品、对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，阴性对照无相应斑点。
3 含量测定
3.1 色谱条件
色谱柱：SunFire C18（4.6 mm×250 mm，5 ?m）；流动相：甲醇-0.1%磷酸溶液（85∶15）；检测波长：254 nm；流速：1.0 mL/min；进样量：10 ?L；柱温：30 ℃。色谱图见图1。
3.2 对照品溶液的制备
精密称取大黄酸、大黄素对照品适量，加甲醇分别制成每1 mL含大黄酸11 ?g、大黄素112 ?g的溶液。
3.3 供试品溶液的制备 取本品适量，研细，取约1 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加10 mL三氯甲烷和80 mL/L HCl，超声处理（功率180 W，频率38 kHz）1 h，分别用三氯甲烷萃取（3×10 mL），合并三氯甲烷液，回收三氯甲烷，最后用甲醇溶解并定容至10 mL，摇匀，用0.45 ?m滤膜压滤后，滤液备用。
3.4 阴性对照溶液的制备
取除大黄外的处方量药材，按照制剂制备工艺同法制得阴性样品。取此阴性样品1 g，按“3.3”项下方法制备，即得。
3.5 线性关系考察
精密吸取大黄素对照液4、5、6、7、8、10、12 ?L，按“3.1”项下色谱条件连续进样3次，以进样量为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，其回归方程为Y=4×106X-0.31×106， r=0.999 7，结果表明大黄素在0.448～1.344 ?g范围内线性关系良好；精密吸取大黄酸对照液1、2、3、4、5、6、7 ?L，按“3.1”项下色谱条件连续进样3次，以进样量为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，其回归方程为Y=2×107X，r=0.999 8，结果表明大黄酸在0.011～0.077 ?g范围内线性关系良好。
3.6 稳定性试验
取同一供试品溶液，在2、4、8、12、18、20、24 h分别进样，大黄素、大黄酸RSD分别为1.31%、0.89%，说明对供试品在24 h内稳定。
3.7 精密度试验
取对照品溶液进样10 ?L，连续进样6次，记录峰面积，大黄素峰面积RSD=1.65%，大黄酸峰面积RSD=1.52%。表明精密度良好。
3.8 重复性试验
精密吸取供试品溶液10 ?L，连续进样5次，记录峰面积，结果大黄素平均峰面积为4 006 630，RSD=1.23%；大黄酸平均峰面积为931 807，RSD=1.56%。表明重复性良好。
3.9 加样回收率试验
取已知含量的供试品细粉约0.5 g，精密称定，共12份，分别置于具塞锥形瓶中，精密加入大黄素、大黄酸对照品溶液适量，依法测定。结果见表1。
3.10 样品含量测定
取10批样品，按供试品溶液方法进行制备，按“3.1”项下色谱条件进行含量测定，每批测3份。结果见表2。根据10批样品平均含量，按转移率80%计，通便茶含大黄酸≥0.41%、大黄素≥0.26%。
4 讨论
用薄层色谱法鉴别本制剂，能检测到大黄、黄芩、枳壳的相关成分，色谱斑点清晰，附近无杂质斑点干扰，方法简便、快速、可行性及重复性好，结果准确、可靠，可用于该复方制剂质量控制中的定性分析。
含量测定用供试品溶液制备时，我们对2种提取方法即三氯甲烷和盐酸提取与甲醇提取[1]进行了比较，结果接近，为操作方便采用三氯甲烷和盐酸提取。本试验比较了不同溶剂、不同提取方法及不同超声时间对制剂提取效果的影响，结果以甲醇超声1 h的提取效率最高[2-4]。
经过多批次检验，对样品进行薄层色谱定性分析和相关成分含量测定，通便茶含大黄酸≥0.41%、大黄素≥0.26%。制剂所含其他成分定性及定量分析方法还有待进一步研究。
参考文献：
[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典：一部[S].北京：中国医药科技出版社，2010：22-23.
[2] 王昌瑞，徐溢，张子春，等.虎杖的提取分离和纯化技术研究进展[J].中成药，2012，34（2）：335-339.
[3] 杨振涛，陈霞，李黎明，等.正交实验法提取网果酸模中大黄素和大黄酚的工艺研究[J].西北药学，2011，26（11）：24.
[4] 朱育凤，徐璨.止痒洗剂的定性定量分析[J].中国中医药信息杂志， 2010，17（8）：42-43.
（收稿日期：2013-04-28，编辑：陈静）
关键词：通便茶；质量标准；薄层色谱法；高效液相色谱法；大黄素；大黄酸
中图分类号：R284.1 文献标识码：A 文章编号：1005-5304（2013）10-0051-03
通便茶为本院研制的纯中药袋泡剂，由大黄、黄芩、枳壳、甘草等组成，具有缓泻通便作用，用于肠胃燥热致大便秘结等症。为有效控制该制剂的质量，笔者采用薄层色谱法对通便茶中所含主要成分大黄、黄芩、枳壳进行定性鉴别，采用高效液相色谱法（HPLC）测定制剂中大黄素、大黄酸的含量，现报道如下。
1 仪器与试药
Waters2695高效液相色谱仪，Waters2998二极管阵列检测器（美国Waters）；分析天平（Shimadzu Aux220，日本岛津）；超声波清洗器（SCQ-250，上海声浦超声波设备厂）；硅胶G板（青岛海洋化工厂分厂）；玻璃点样毛细管（华西医科大学仪器厂）。
大黄、黄芩、枳壳对照药材（批号分别为120902-200408、120955-200010、121008-200505，中国药品生物制品检定所）；大黄素、大黄酸、黄芩苷、柚皮苷对照品（批号分别为110756- 200110、110757-200206、110715-201011、110722-200610，中国药品生物制品检定所）；通便茶（批号分别为20130329、20130330、20130401、20130402、20130403、20130404、20130405、20130406、20130408、20130409，本院制剂室制备）；甲醇为色谱纯，其余试剂均为分析纯。
2 薄层鉴别
2.1 大黄
取本品粉末0.2 g，加甲醇2 mL，超声处理（功率180 W，频率38 kHz）1 h，滤过，滤液蒸干，然后加甲醇1 mL使溶解，作为供试品溶液。另取大黄对照药材0.1 g，加甲醇20 mL，同法制成对照药材溶液。再取大黄素对照品，加甲醇制成1 mg/mL的溶液，作为对照品溶液。按处方量取除大黄外其余药味，按工艺要求制成缺大黄的样品，按供试品溶液制备方法，制备阴性对照溶液。照薄层色谱法[2010年版《中华人民共和国药典》（一部）附录ⅥB]试验，吸取上述溶液各5 ?L，分别点于同一硅胶G薄层板上。以水饱和的苯-甲酸乙酯-甲酸-甲醇（3∶3∶1∶1）为展开剂展开，展距10 cm，置紫外灯（365 nm）下检视。供试品色谱中，与对照品和对照药材色谱相应位置上可见橙红色荧光斑点，置氨气中熏蒸后，日光下检视，斑点变为红色。阴性对照无干扰。
2.2 黄芩
取本品粉末0.2 g，加甲醇2 mL，超声处理（功率180 W，频率38 kHz）1 h，滤过，滤液蒸干，然后加甲醇1 mL使溶解，作为供试品溶液。取黄芩对照药材5 g、黄芩阴性对照样品10 g，同法制成对照药材溶液和阴性对照溶液。再取黄芩苷对照品加甲醇制成0.1 mg/mL的对照品溶液。照薄层色谱法[2010年版《中华人民共和国药典》（一部）附录ⅥB]试验，吸取上述溶液各5 ?L，分别点于同一硅胶G薄层板上。以乙酸乙酯-丁酮-乙酸-水（10∶7∶2∶2）为展开剂，展开，取出，吹干，喷以2%三氯化铁乙醇液。供试品色谱中，与对照品色谱相应位置上显相同的墨绿色斑点，与对照药材色谱相应位置上显相同颜色的斑点，阴性对照无相应斑点。
2.3 枳壳
取本品5 g，加甲醇25 mL，超声处理（功率180 W，频率38 kHz） 1 h，滤过，滤液蒸干，残渣加10 mL水，用乙醚振摇提取3次，每次15 mL，弃去乙醚液，蒸馏回收乙醚，再用乙酸乙酯振摇提取3次，每次20 mL，合并乙酸乙酯液（水层备用），蒸干，残渣加甲醇1 mL使溶解，作为供试品溶液。另取枳壳对照药材0.5 g，加甲醇20 mL，同法制成对照药材溶液。再取柚皮苷对照品，加甲醇制成1 mg/mL的对照品溶液。按处方量取除枳壳外其余药味，按工艺要求制成缺枳壳的样品，按供试品溶液制备方法，制备阴性对照溶液。照薄层色谱法[2010年版《中华人民共和国药典》（一部）附录ⅥB]试验，吸取上述4种溶液各5 ?L，分别点于同一硅胶G薄层板上。以三氯甲烷-甲醇-冰醋酸（10∶2∶0.1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1%三氯化铝乙醇溶液。供试品色谱中，在与对照品、对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，阴性对照无相应斑点。
3 含量测定
3.1 色谱条件
色谱柱：SunFire C18（4.6 mm×250 mm，5 ?m）；流动相：甲醇-0.1%磷酸溶液（85∶15）；检测波长：254 nm；流速：1.0 mL/min；进样量：10 ?L；柱温：30 ℃。色谱图见图1。
3.2 对照品溶液的制备
精密称取大黄酸、大黄素对照品适量，加甲醇分别制成每1 mL含大黄酸11 ?g、大黄素112 ?g的溶液。
3.3 供试品溶液的制备 取本品适量，研细，取约1 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加10 mL三氯甲烷和80 mL/L HCl，超声处理（功率180 W，频率38 kHz）1 h，分别用三氯甲烷萃取（3×10 mL），合并三氯甲烷液，回收三氯甲烷，最后用甲醇溶解并定容至10 mL，摇匀，用0.45 ?m滤膜压滤后，滤液备用。
3.4 阴性对照溶液的制备
取除大黄外的处方量药材，按照制剂制备工艺同法制得阴性样品。取此阴性样品1 g，按“3.3”项下方法制备，即得。
3.5 线性关系考察
精密吸取大黄素对照液4、5、6、7、8、10、12 ?L，按“3.1”项下色谱条件连续进样3次，以进样量为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，其回归方程为Y=4×106X-0.31×106， r=0.999 7，结果表明大黄素在0.448～1.344 ?g范围内线性关系良好；精密吸取大黄酸对照液1、2、3、4、5、6、7 ?L，按“3.1”项下色谱条件连续进样3次，以进样量为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，其回归方程为Y=2×107X，r=0.999 8，结果表明大黄酸在0.011～0.077 ?g范围内线性关系良好。
3.6 稳定性试验
取同一供试品溶液，在2、4、8、12、18、20、24 h分别进样，大黄素、大黄酸RSD分别为1.31%、0.89%，说明对供试品在24 h内稳定。
3.7 精密度试验
取对照品溶液进样10 ?L，连续进样6次，记录峰面积，大黄素峰面积RSD=1.65%，大黄酸峰面积RSD=1.52%。表明精密度良好。
3.8 重复性试验
精密吸取供试品溶液10 ?L，连续进样5次，记录峰面积，结果大黄素平均峰面积为4 006 630，RSD=1.23%；大黄酸平均峰面积为931 807，RSD=1.56%。表明重复性良好。
3.9 加样回收率试验
取已知含量的供试品细粉约0.5 g，精密称定，共12份，分别置于具塞锥形瓶中，精密加入大黄素、大黄酸对照品溶液适量，依法测定。结果见表1。
3.10 样品含量测定
取10批样品，按供试品溶液方法进行制备，按“3.1”项下色谱条件进行含量测定，每批测3份。结果见表2。根据10批样品平均含量，按转移率80%计，通便茶含大黄酸≥0.41%、大黄素≥0.26%。
4 讨论
用薄层色谱法鉴别本制剂，能检测到大黄、黄芩、枳壳的相关成分，色谱斑点清晰，附近无杂质斑点干扰，方法简便、快速、可行性及重复性好，结果准确、可靠，可用于该复方制剂质量控制中的定性分析。
含量测定用供试品溶液制备时，我们对2种提取方法即三氯甲烷和盐酸提取与甲醇提取[1]进行了比较，结果接近，为操作方便采用三氯甲烷和盐酸提取。本试验比较了不同溶剂、不同提取方法及不同超声时间对制剂提取效果的影响，结果以甲醇超声1 h的提取效率最高[2-4]。
经过多批次检验，对样品进行薄层色谱定性分析和相关成分含量测定，通便茶含大黄酸≥0.41%、大黄素≥0.26%。制剂所含其他成分定性及定量分析方法还有待进一步研究。
参考文献：
[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典：一部[S].北京：中国医药科技出版社，2010：22-23.
[2] 王昌瑞，徐溢，张子春，等.虎杖的提取分离和纯化技术研究进展[J].中成药，2012，34（2）：335-339.
[3] 杨振涛，陈霞，李黎明，等.正交实验法提取网果酸模中大黄素和大黄酚的工艺研究[J].西北药学，2011，26（11）：24.
[4] 朱育凤，徐璨.止痒洗剂的定性定量分析[J].中国中医药信息杂志， 2010，17（8）：42-43.
（收稿日期：2013-04-28，编辑：陈静）