5-杂氮-2’-脱氧胞苷对肺癌A549细胞系中SFRP2基因表达以及细胞迁移侵袭的影响

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目的 研究肺癌A549细胞系中5-杂氮-2’-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)对分泌型卷曲相关蛋白2基因(SFRP2)甲基和基因表达的影响,以及探究5-Aza-CdR对A549细胞迁移和侵袭的影响。方法 收集2018年至2019年于南阳市中心医院切除的肺癌样本以及相应的癌旁组织,分为肺癌和癌旁组,通过实时定量PCR(qPCR)和蛋白质印迹法(Western blot)检测SFRP2基因mRNA和蛋白表达水平。甲基化特异性PCR(MSP)法分别检测60例肺癌组和癌旁组中SFRP2基因甲基化水平;采用对肺癌A549细胞系进行去甲基化处理,得到SFRP2基因去甲基化组。未处理肺癌A549细胞系为对照组。对照组和SFRP2基因去甲基化组通过MSP法检测SFRP2基因基因的甲基化状态;采用划痕实验和侵袭迁移小室法(Transwell小室)分别检测肺癌A549细胞系的迁移和侵袭能力;通过qPCR和Western blot检测SFRP2、GSK3β、p-GSK3β、β-catenin和p-β-catenin的mRNA和蛋白表达水平。结果 qPCR和Western blot结果显示,与癌旁组比较,肺癌组中的SFRP2基因的mRNA和蛋白表达量显著降低(P<0.05);MSP结果显示,与癌旁组比较,48例肺癌组的SFRP2基因发生甲基化。MSP结果显示,与对照组比较,SFRP2基因去甲基化组的SFRP2基因甲基化水平显著降低(P<0.05)。划痕实验和Transwell小室结果显示,与对照组比较,SFRP2基因去甲基化组的迁移和侵袭能力显著降低(P<0.05)。qPCR和Western blot结果显示,与对照组比较,SFRP2基因去甲基化组的p-GSK3β、β-catenin的mRNA和蛋白表达显著减少(P<0.05),SFRP2、GSK3β和p-β-catenin的mRNA和蛋白表达显著增多(P<0.05)。结论 SFRP2基因基因去甲基化可以恢复SFRP基因转录表达,阻碍Wnt/β-catenin信号通路,从而抑制肺癌A549细胞系迁移和侵袭能力。
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