【摘 要】
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通过软件预测猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）N蛋白的主要抗原性表位，利用化学合成的方法合成三条针对N蛋白抗原表位的多肽作为包被抗原，筛选最优的一条建立了检测PRRSV抗体的间接ELISA方法。该ELISA方法的最适条件为：以2.5 μg/ml的合成肽（Pep3）包被酶标板，4℃过夜，不需封闭，阴阳性血清分别稀释200倍，37℃ 作用60 min，辣根过氧化酶（HRP）标记兔抗猪酶标二抗1000
【基金项目】
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山东省海洋生物健康促进产业职业教育集团重点资助项目（HYSW2101）；
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通过软件预测猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）N蛋白的主要抗原性表位，利用化学合成的方法合成三条针对N蛋白抗原表位的多肽作为包被抗原，筛选最优的一条建立了检测PRRSV抗体的间接ELISA方法。该ELISA方法的最适条件为：以2.5 μg/ml的合成肽（Pep3）包被酶标板，4℃过夜，不需封闭，阴阳性血清分别稀释200倍，37℃ 作用60 min，辣根过氧化酶（HRP）标记兔抗猪酶标二抗1000倍稀释，37℃作用30 min，TMB37℃显色15 min，2 M H2SO4终止反应，酶标仪A（450 nm）读数.利用所建立的方法测定50份阴性血清的值计算S/P值，求得当S/P值≥0.324时，即为阳性，0.324＞样品S/P值＞0.212即为可疑，S/P值≤0.212时，即为阴性。之后进行了灵敏度试验，将标准阳性血清进行1:3200倍稀释仍然呈现阳性，说明该检测方法具有较高的灵敏性；与常见的PCV2、CSFV、PRV、SIV四种猪疫病阳性血清无交叉反应，说明该检测方法具有较高的特异性；通过对临床的200份样品进行检测，与IDEXX-PRRSV抗体检测试剂盒相比较，符合率达91.4%，说明该校测方法具有较高的符合率。本研究建立的ELISA方法对于PRRSV的常规诊断及流行病学调查具有重要意义。
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