比较腹腔内与阴囊内注射GYY4137对大鼠睾丸缺血再灌注损伤的治疗作用。
方法选取健康成年雄性SD大鼠40只随机分为4组,每组10只,对照组(A组)、睾丸缺血再灌注损伤组(B组)、睾丸缺血再灌注损伤+GYY4137腹腔给药组(C组)、睾丸缺血再灌注损伤+GYY4137阴囊给药组(D组)。A组为假手术组,B、C、D组大鼠建立单侧睾丸扭转复位模型,C组和D组在复位前分别腹腔内和阴囊内注射GYY4137(100 μmol/kg)。复位4 h后取左侧睾丸待测。苏木精-伊红(HE)染色观察睾丸组织病理改变;测定丙二醛(MDA)、超氧化物岐化酶(SOD)含量;以原位缺口末端标记法(TUNEL)检测生精细胞凋亡指数;采用免疫组织化学检测B细胞淋巴瘤/白血病-2相关X蛋白(bax)和半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶(Caspase)-3的表达水平;蛋白质印迹法(Western blot)检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素(IL)-1β蛋白表达水平;实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)方法检测睾丸组织中bax、Caspase-3、TNF-α和IL-1β表达水平,应用SPSS 20.0统计软件分析,计量资料以均值±标准差(Mean±SD)表示。
结果B组可见生精细胞广泛脱落坏死,上皮排列紊乱。与B组比较,C、D组损伤明显改善;B组中MDA含量(5.13±0.26)与A组(1.21±0.20)比较显著上升(t=37.790,P<0.05),SOD含量(0.22±0.04)与A组(0.86±0.05)比较显著下降(t=30.710,P<0.05);与B组比较,C和D组MDA含量(3.26±0.23、2.42±0.24)明显下降(t=17.040、24.220,P<0.05),SDA含量(0.42±0.04、0.58±0.04)显著上升(t=11.450、20.070,P<0.05);B组凋亡指数(33.56±1.45)比A组(6.35±1.12)显著增高(t=46.960,P<0.05),C组和D组凋亡指数(22.58±1.67、17.86±1.65)与B组比较明显下降(t=15.700、22.600,P<0.05);免疫组化结果显示B组中bax和Caspase-3的表达水平较A组显著增加,C组和D组较之明显降低;B组TNF-α(0.774±0.042)和IL-1β(0.674±0.037)的表达水平与A组(0.147±0.022、0.136±0.018)比较明显增高(t=41.820、41.350,P<0.05),C组(0.425±0.029、0.417±0.030)和D组(0.331±0.027、0.308±0.025)较之明显降低(t=21.620、17.060、28.060、25.920,P<0.05);PCR结果显示,与B组(5.35±0.43、3.76±0.31、4.35±0.31、3.86±0.34)比较,C组(3.86±0.32、2.56±0.21、3.08±0.25、2.92±0.28)和D组(3.78±0.36、2.23±0.22、2.96±0.26、2.56±0.25)bax、Caspase-3、TNF-α和IL-1β的表达降低均有所下降(t=8.790、10.130、10.080、6.750、8.850、12.730、10.860、9.740,P<0.05),D组下降程度较显著。
结论GYY4137对大鼠睾丸缺血再灌注损伤具有明显的保护作用,阴囊内给药的疗效与腹腔内给药比较更佳。