改良彗星试验检测紫外线照射致淋巴细胞DNA损伤

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目的 用不同方法提取外周血淋巴细胞进行彗星实验 ,以确认最佳实验条件。通过紫外线照射全血比较不同铺胶层数对淋巴细胞DNA损伤的影响。方法 将铺有细胞、凝胶混合物的玻片在pHl0的碱性裂解液中作用 1h ,碱性电泳液中预电泳 2 0min ,2 5V30 0mA电泳 2 0min ,15min中和 2次 ,5 μg/mlPI染色 15min ,计算彗星细胞率。并用本实验室方法观察紫外线照射对全血淋巴细胞的DNA损伤。结果 用生理盐水、PBS作为缓冲液在冰浴下提取淋巴细胞的彗星细胞率与全血结果相近。但室温下提取淋巴细胞DNA损伤明显增加。 30W紫外灯照射 30min、45min与未照射组相比彗星细胞率明显增加 ,差异有显著性意义 (P <0 0 5 ) ,一层胶与二层胶结果相比差异无显著性意义 (P >0 0 5 )。结论 全血用于检测淋巴细胞DNA损伤操作简便 ,结果可靠 ,无人为操作引起的DNA损伤 ,紫外线可诱导全血淋巴细胞DNA链断裂 ,有明显的剂量—效应趋势 ,减少铺胶层数 ,节省时间 ,结果与二层胶彗星细胞率无差异。
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