【摘 要】
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目的 探讨miR-140-5p对结直肠癌(CRC)细胞自噬的调控及对奥沙利铂敏感性的影响.方法 采用实时荧光定量多聚核苷酸链式反应(RT-qPCR)检测30例CRC组织与相应癌旁组织中miR-140-5p mRNA的表达水平,并检测miR-140-5p mRNA在CRC细胞系及正常结直肠细胞系中的表达情况.通过miR-140-5p mimics转染CRC细胞HCT 116,RT-qPCR检测转染效率;细胞计数试剂(CCK-8)法检测转染组和对照组在奥沙利铂处理下的细胞活性;蛋白质印迹法(Western b
【机 构】
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中国医科大学附属第四医院普外科 沈阳110032
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目的 探讨miR-140-5p对结直肠癌(CRC)细胞自噬的调控及对奥沙利铂敏感性的影响.方法 采用实时荧光定量多聚核苷酸链式反应(RT-qPCR)检测30例CRC组织与相应癌旁组织中miR-140-5p mRNA的表达水平,并检测miR-140-5p mRNA在CRC细胞系及正常结直肠细胞系中的表达情况.通过miR-140-5p mimics转染CRC细胞HCT 116,RT-qPCR检测转染效率;细胞计数试剂(CCK-8)法检测转染组和对照组在奥沙利铂处理下的细胞活性;蛋白质印迹法(Western blot)检测微管相关蛋白轻链3(LC3)的表达;免疫荧光检测LC3荧光斑点的表达.转染miR-140-5p mimics并共处理自噬激活剂雷帕霉素后,CCK-8法检测共处理组和单独转染miR-140-5p mimics组CRC细胞对奥沙利铂的敏感性;克隆形成实验检测CRC细胞增殖水平.结果 miR-140-5p在CRC组织和CRC细胞系中的表达分别低于相应癌旁组织和正常结直肠细胞系,差异有统计学意义(P<0.05).CCK-8结果表明,过表达miR-140-5p促进CRC细胞对奥沙利铂的敏感性(P<0.05);Western blot表明过表达miR-140-5p促进自LC3II/I表达水平降低,免疫荧光表明过表达miR-140-5p抑制LC3荧光斑点表达(P<0.05).过表达miR-140-5p与雷帕霉素共处理后,CCK-8表明与单独转染miR-140-5p mimics组相比,共处理组细胞对奥沙利铂敏感性降低;克隆形成实验表明共处理组细胞增殖水平相对增加.结论 CRC组织和CRC细胞系中miR-140-5p的表达分别低于相应癌旁组织和正常结直肠细胞系,miR-140-5p通过抑制自噬促进了CRC细胞对奥沙利铂的敏感性,可能为CRC的靶向治疗提供一定的策略.
其他文献
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