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5. 人磷酸二脂酶基因反义RNA重组腺病毒载体的构建

人磷酸二脂酶基因反义RNA重组腺病毒载体的构建

来源 :中华男科学杂志 | 被引量 : 0次 | 上传用户：mm1234567mm

【摘 要】

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目的:探讨人磷酸二脂酶5(PDE5)基因反义RNA重组腺病毒载体的构建方法.方法:根据基因库确定具有完整PDE5A1启动子活性的cDNA基因序列,并设计反义链,两端加内切酶修饰;通过转载

【作 者】

：

赵永平 白文俊 闫征 陈国强 刘士军 邓庆平 王晓峰 

【机 构】

：

北京大学人民医院泌尿外科

【出 处】

：

中华男科学杂志

【发表日期】

：

2005年5期

【关键词】

：

磷酸二脂酶 重组腺病毒 反义核酸 载体 phosphodiesterase recombinant advenovirus antisense-RNA vect 

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目的:探讨人磷酸二脂酶5(PDE5)基因反义RNA重组腺病毒载体的构建方法.方法:根据基因库确定具有完整PDE5A1启动子活性的cDNA基因序列,并设计反义链,两端加内切酶修饰;通过转载体克隆方法构建转入载体(pENTR)并测序;借助Gateway腺病毒表达载体系统进行重组反应构建重组腺病毒表达载体pAd/CMV/V5/antisense-PDE5A1;Pac Ⅰ酶切后转染293A细胞系进行包装、扩增;病毒质粒酶切后电泳鉴定及PCR检测;CsCl梯度离心法纯化病毒,病毒空斑实验进行滴度测定.结果:pENT

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