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目的探讨过表达微小RNA-204(miR-204)靶向Bcl-2诱导胰岛β细胞凋亡的作用机制。方法小鼠胰岛瘤细胞MIN6用含β-巯基乙醇的DMEM高糖培养基培养,采用脂质体Lipofectamine 2000转染miR-204化学合成过表达物和(或)Bcl-2过表达质粒,制备成miR-204(+)组和miR-204(+)+Bcl-2(+)组。转染48 h后,MTT法检测细胞存活;Hoechst33258染色检测细胞凋亡;ELISA法测定胰岛素分泌;实时荧光定量聚合酶链反应(q PCR)检测miR-204含量及Bcl-2、Bax和胱天蛋白酶3 m RNA表达水平;Western蛋白质印迹法检测Bcl-2、Bax和活化的胱天蛋白酶3表达水平。结果 MTT结果显示,miR-204(+)组细胞存活率显著低于正常对照组(P<0.01),而miR-204(+)+Bcl-2(+)组相较于miR-204(+)组细胞存活率显著升高(P<0.05);Hoechst33258染色结果显示,miR-204(+)组出现大量细胞凋亡,miR-204(+)+Bcl-2(+)组细胞凋亡率有所下降;胰岛素分泌结果显示,高糖(葡萄糖30 mmol·L-1)刺激下的miR-204(+)组细胞胰岛素分泌显著低于高糖刺激下的正常对照组(P<0.01)和miR-204(+)+Bcl-2(+)组(P<0.01);q PCR结果显示,miR-204(+)组miR-204水平显著高于正常对照组(P<0.01),而Bcl-2 m RNA表达水平显著低于正常对照组(P<0.01)和miR-204(+)+Bcl-2(+)组(P<0.01),各组Bax和胱天蛋白酶3 m RNA水平无显著变化;Western蛋白质印迹检测结果显示,miR-204(+)组Bcl-2蛋白表达水平显著低于miR-204(+)+Bcl-2(+)组(P<0.05)和正常对照组(P<0.01),而Bax和活化的胱天蛋白酶3蛋白表达水平显著高于其他两组(P<0.01)。结论过表达miR-204可能通过靶向Bcl-2促进胰岛β细胞凋亡。