【摘 要】
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目的建立分离、冻存及鉴定外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell, PBMC)的方法,检测PBMC冻存不同时间后各种细胞的含量和活性。方法选择2016年8月至2018年3月
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目的建立分离、冻存及鉴定外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell, PBMC)的方法,检测PBMC冻存不同时间后各种细胞的含量和活性。方法选择2016年8月至2018年3月北京市红十字血液中心无偿献血志愿者20人,从志愿者全血白膜层中分离出PBMC并用细胞冻存液冻存于液氮中,应用流式细胞术(fluorescence-activated cell sorter, FACS)检测分离出的及冻存复苏的PBMC中粒细胞、单核细胞、淋巴细胞(T细胞、B细胞和NK细胞)的含量及其死细胞的含量。结果 PBMC中淋巴细胞占大多数[(75.45±13.20)%],其次为单核细胞[(13.08±4.97)%]和粒细胞[(11.47±14.40)%]。与白膜层相比,PBMC中粒细胞、单核细胞和淋巴细胞含量分别减少了94%、62%和58%。PBMC冻存后1周、1个月、3个月、1年后,粒细胞死亡比例明显增加,粒细胞占比明显下降(P<0.05);单核细胞占比明显上升(P<0.05),淋巴细胞总数及T细胞、B细胞、NK细胞占比变化很大。结论本研究所确立的方法将为科研人员更好地处理、保存和利用外周血PBMC提供帮助。
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