【摘 要】
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目的 探讨建立快速鉴定角膜常见致病真菌的液相核酸芯片检测系统及其应用于真菌性角膜炎临床快速诊断的可行性.方法 实验研究.设计针对5种角膜常见致病真菌(茄病镰刀菌、串珠
【机 构】
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山东省眼科研究所,山东省眼科学重点实验室-省部共建国家重点实验室培育基地,青岛,266071;山东省医药生物技术研究中心;
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目的 探讨建立快速鉴定角膜常见致病真菌的液相核酸芯片检测系统及其应用于真菌性角膜炎临床快速诊断的可行性.方法 实验研究.设计针对5种角膜常见致病真菌(茄病镰刀菌、串珠镰刀菌、尖孢镰刀菌、烟曲霉菌及黄曲霉菌)rRNA基因内转录间隔(ITS)区的种特异性探针,5端氨基C12修饰后与不同荧光色的微球结合,建立液相核酸芯片检测系统.将目的 真菌的5株标准菌株和42株角膜分离保存菌株的基因组DNA以一对真菌通用引物扩增并标记后用于杂交检测.实验中设立单一菌种检测与多菌种混合检测的比较,以及芯片检测与琼脂糖凝胶电泳检测的比较,采用配对设计资料的t检验和Spearman等级相关分析对检测结果 进行统计学分析,进而评估该检测系统的特异性、灵敏度和重复性.结果 所建立的液相核酸芯片体系可在聚合酶链反应(PCR)后3 h内准确将5株标准菌株鉴定至菌种的水平;42株角膜分离保存菌株单次检测阳性率达95.2%;阳性信号与背景比值位于5.6～13.3之间;单一菌种检测和5种菌种平行检测的中位荧光强度(MFI)差异无统计学意义(t=0.2524,P=0.8132);MFI的变化与PCR产物的量呈正相关(rs=1.0000,P<0.01);最低检测浓度为0.94 ng PCR产物,比琼脂糖凝胶电泳低40倍;4次重复检测的变异系数在1.8%～13.7%之间.结论 所建立的液相芯片检测系统具有较高的特异性、灵敏度及重复性,可同时完成对5种角膜常见致病真菌的菌种检测,为液相芯片技术在临床真菌快速诊断中的应用奠定了实验基础.(中华眼科杂志,2009,45:110-114)
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