论文部分内容阅读
目的 探讨六神胶囊的抗炎作用及机制.方法 RAW264.7细胞分为六神胶囊组和地塞米松组,六神胶囊按9.76、4.88、2.44、1.22、0.61、0.31、0.15 μg/ml梯度稀释;地塞米松按250、125、62.5、31.25、15.63、7.81、3.91 μg/ml梯度稀释,选择细胞存活率大于90％的最大3个六神胶囊浓度和最大无毒剂量的地塞米松进行后续实验.RAW264.7细胞分为空白组,地塞米松组,模型组及六神胶囊高、中、低剂量组.除空白组外,其余各组采用脂多糖诱导建立炎症模型.造模后六神胶囊高、中、低剂量组分别加入筛选浓度的高、中、低浓度六神胶囊溶液各1 ml;地塞米松组加入筛选浓度的地塞米松溶液1 ml;模型组和空白组加入1 ml培养液.24 h后收集细胞上清液检测一氧化氮(NO)的浓度,ELISA法检测细胞中白细胞介素1β (IL-1β)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)的含量,实时荧光定量PCR法检测细胞中IL-1β、TNF-α、IL-6和诱导型一氧化氮合酶(iNOS) mRNA表达,蛋白印迹实验检测核因子κB p65 (NF-κB p65)、磷酸化核因子κB p65 (p-NF-κB p65)、核因子抑制蛋白κB (IκBα)和磷酸化核因子抑制蛋白κB(p-IκBα)表达.结果 选择六神胶囊1.22、0.61、0.31 μg/ml浓度,地塞米松31.25 μg/ml浓度进行后续实验.与空白组比较,模型组细胞中TNF-α、IL-1β、IL-6及NO水平,TNF-α、IL-1β、IL-6和iNOS mRNA表达,p-IκBα、p-NF-κB p65蛋白表达显著升高,IκBα蛋白表达显著降低(P＜0.01);与模型组比较,地塞米松组及六神胶囊中、高剂量组细胞TNF-α、IL-1β、IL-6及NO水平,TNF-α、IL-1β、IL-6和iNOS mRNA表达,p-IκBα和p-NF-κB p65蛋白表达均显著降低,IκBα蛋白表达升高(P＜O.05或P＜O.01);与地塞米松组比较,六神胶囊高剂量组IL-1β水平降低、IL-6水平升高,TNF-α mRNA及p-NF-κB p65蛋白表达显著降低(P＜0.01);六神胶囊高剂量组TNF-α、IL-1β含量,IL-6、TNF-α mRNA表达,p-NF-κB p65蛋白表达低于六神胶囊中、低剂量组(P＜0.01).结论 六神胶囊在体外具有良好的抗炎活性,可能通过抑制NF-κB信号通路的激活,降低iNOS的表达,进一步抑制NO的合成和炎性细胞因子的产生,从而改善炎症反应,以高剂量效果较佳.