【摘 要】
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目的:以绿色荧光蛋白(GFP)作为报道基因,探讨转染GFP的培养细胞检测细胞周期的流式细胞技术.方法:用贴壁细胞MCF-7细胞以脂质体转染PEGFP-C2,转染后24 h收集细胞,分别用70%乙
【机 构】
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广州医学院实验医学研究中心,广东,广州,510182
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目的:以绿色荧光蛋白(GFP)作为报道基因,探讨转染GFP的培养细胞检测细胞周期的流式细胞技术.方法:用贴壁细胞MCF-7细胞以脂质体转染PEGFP-C2,转染后24 h收集细胞,分别用70%乙醇固定、1%多聚甲醛固定和1%多聚甲醛固定后用透膜剂透膜PI染色,以非转染细胞作为阴性对照,转染GFP非固定细胞作为阳性对照,用流式细胞仪检测.结果:用70%乙醇固定细胞导致GFP完全淬灭;用1%多聚甲醛固定保持99%的GFP阳性率,荧光强度稍有下降;而经过皂素破膜和PI染色后,GFP的阳性率也能保持有原来的80%左右;1%多聚甲醛固定24h内对GFP的阳性率没有大的影响.结论:对于含有GFP基因的细胞在进行流式细胞周期的检测时,应避免使用细胞周期常规的乙醇固定方法;1%多聚甲醛固定加皂素破膜能有效保证GFP的荧光活性.
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