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目的
观察Notch1通路活化对胶质瘤干细胞(GSCs)迁移和侵袭能力的影响并探讨其潜在机制。
方法将U87胶质瘤细胞置于干细胞培养基中悬浮培养，使用免疫磁珠法分选获得CD133阳性的胶质瘤细胞，免疫荧光染色检测CD133及巢蛋白鉴定GSCs。将携带Notch1抑制物核苷酸序列(shRNA-Notch1)、阴性对照核苷酸序列(shRNA-NC)的重组慢病毒转染至体外培养的U87来源的GSCs中，分别作为shRNA-Notch1组、shRNA-NC组，同时设不做处理的空白对照组，在成球后行通过荧光定量PCR检测3组细胞Notch1 mRNA的表达；Western blotting检测3组细胞Notch1、Hes1、Akt、pAkt、mTOR、pmTOR蛋白的表达；Transwell细胞迁移和侵袭实验观察3组细胞迁移和侵袭能力的强弱。
结果免疫荧光染色检测显示肿瘤细胞球阳性表达神经干细胞标志物CD133和巢蛋白。与shRNA-NC组和空白对照组相比，shRNA-Notch1组GSCs的Notch1 mRNA和蛋白、pAkt、mTOR、pmTOR蛋白表达降低，差异有统计学意义(P<0.05)，而Akt蛋白水平没有明显变化，差异无统计学意义(P>0.05)。Transwell迁移及侵袭实验均显示与shRNA-NC组和空白对照组相比，shRNA-Notch1组穿膜的细胞数目降低，差异有统计学意义(P<0.05)。
结论抑制Notch1通路活性后可能通过PI3K通路来调节GSCs的迁移和侵袭能力。