【摘 要】
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本研究采用RT-PCR扩增猪δ冠状病毒（PDCoV）的核衣壳蛋白（Nucleocapsid，N）基因，构建原核表达质粒pET-32a-N，转化至大肠杆菌BL21（DE3）感受态细胞，经IPTG诱导表达，通过Ni-NTA亲和层析对表达蛋白进行纯化，将纯化后的重组蛋白免疫小鼠，以PDCoV病毒包被酶标板，采用ELISA方法检测小鼠血清抗体，评价重组蛋白的免疫原性。结果显示，PDCoV重组N蛋白（～58
【基金项目】
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河南省重点研发与推广专项（科技攻关）-农业领域项目（212102110098）；
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本研究采用RT-PCR扩增猪δ冠状病毒（PDCoV）的核衣壳蛋白（Nucleocapsid，N）基因，构建原核表达质粒pET-32a-N，转化至大肠杆菌BL21（DE3）感受态细胞，经IPTG诱导表达，通过Ni-NTA亲和层析对表达蛋白进行纯化，将纯化后的重组蛋白免疫小鼠，以PDCoV病毒包被酶标板，采用ELISA方法检测小鼠血清抗体，评价重组蛋白的免疫原性。结果显示，PDCoV重组N蛋白（～58 kDa）在0.2 mmol/L IPTG、20℃条件下诱导12 h表达效果最好，且以可溶性形式存在；表达蛋白经Ni柱纯化后能与抗PDCoV阳性血清发生特异性免疫印迹反应，且能够诱导小鼠产生抗PDCoV特异性抗体，具有良好的免疫原性和反应原性。本研究为下一步建立PDCoV检测方法和开展PDCoV N蛋白功能研究奠定了基础。
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