【摘 要】
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目的构建复制缺陷型重组腺病毒介导短发夹RNA(shRNA)干扰组织因子(TF)在胰岛表达。方法设计并合成四对单链寡核苷酸(ss oligo),经变性退火为双链寡核苷酸(ds oligo)插入穿梭质粒pENTR
【机 构】
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西安交通大学医学院第一附属医院肾移植科
【基金项目】
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卫生部临床重点学科建设项目;国家自然科学基金项目(30571799);高等学校博士学科点科研基金(20050638033)~~
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目的构建复制缺陷型重组腺病毒介导短发夹RNA(shRNA)干扰组织因子(TF)在胰岛表达。方法设计并合成四对单链寡核苷酸(ss oligo),经变性退火为双链寡核苷酸(ds oligo)插入穿梭质粒pENTR/U6载体,测序正确后经脂质体介导入成人胰岛,通过实时定量RT-PCR方法筛选对TF沉默效果最佳穿梭质粒pENTR/U6-shRNA,然后与腺病毒骨架质粒行同源重组,筛选出正确重组子,用293A细胞包装出表达TF-shRNA的复制缺陷型重组腺病毒并测定其病毒滴度,通过实时定量RT-PCR腺病毒沉默TF
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