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探讨SHANK蛋白RH区域交互作用蛋白(SHARPIN)对前列腺癌细胞凋亡调控机制。
方法设计并合成抑制SHARPIN的小干扰RNA 3对,实时荧光定量聚合酶链反应法(FQ-PCR)筛选抑制效率最高者;Western blot验证对前列腺癌细胞中SHARPIN表达的抑制效果。Western blot检测各组中SHARPIN、生存素(Survivin)表达和核转录因子-κB(NF-κB)磷酸化情况;四唑氮化合物(MTS)法检测增殖能力;流式细胞仪检测细胞凋亡。
结果FQ-PCR显示第3对序列对SHARPIN抑制效率最高;Western blot检测显示其对3个前列腺癌细胞株中SHARPIN表达抑制效率均达70%以上。当SHARPIN被抑制后,p65的激活明显受抑,15 min时对p-p65抑制率达95.0%; Survivin的表达比对照组明显下调,加入NF-κB抑制剂后,Survivn表达量虽然也明显下降,但是远没有抑制SHARPIN后表达量下降的明显。抑制SHARPIN后,LNCap、DU145和PC-3的增殖抑制率分别为31.0%、56.8%和54.6%。抑制SHARPIN后,3种前列腺癌细胞早期凋亡明显增加。
结论SHARPIN可以通过NF-κB通路抑制前列腺癌细胞凋亡;Survivin可能是其并不唯一的下游调控因子。