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【摘 要】 沙门氏菌是一种能对人与动物致病的菌种。若食品被沙门氏菌污染，这样被污染的食品会使食用的人群发生食物中毒的现象。因此，建立一种准确而快速的检测方法是对沙门氏菌检测研究的重点，本文利用免疫金渗滤试验技术可对人工染菌（沙门氏菌）的食品进行现场检测。
【关键词】 免疫金渗滤试验技术；食品检测；沙门氏菌
引言：
我们所说的食物中毒是指摄入了含生物性与化学性有毒有害的食品，出现的急性或亚急性疾病。根据国内外的统计，在多种类型的食物中毒事件中，最常见的类型是细菌性的食物中毒。细菌性的食物中毒在全世界的许多国家都是一项值得我们注意的公共卫生问题。在我国，每年发生的细菌性食物中毒事件占所有食物中毒事件总数的比例约为百分之三十到九十。其中，沙门氏菌是引起人们食物中毒和疾病扩散的主要病原菌之一，食源性的疾病对人们的健康产生了严重的威胁，必须引起所有人的广泛重视。
1.沙门氏菌的概念
沙门氏菌是沙门氏菌病的病原体。沙门氏菌属肠杆菌科，目前已发现的菌种约有一千种。沙门氏菌具有菌体抗原、鞭毛抗原和表面抗原共三种抗原结构。观察菌种的抗原成分，可将沙门氏菌分为甲、乙、丙、丁、戊等五个基本菌组。沙门氏菌属有的只能够引起人类的疾病，有的只能够引起动物的疾病，也有的能够使得人和动物都致病。而与人体疾病相关的菌组有甲乙丙三组的副伤寒甲、乙、丙杆菌，丁组的伤寒杆菌，乙组的鼠伤寒杆菌，丙组的猪霍乱杆菌，丁组的肠炎杆菌等。其中伤寒杆菌、副伤寒甲杆菌和副伤寒乙杆菌能够引起人类的疾病，剩下的大多数菌组只能够引起家畜、鼠类和禽类等动物的疾病，但是它们也可以通过污染食物的方式而引起人类的食物中毒。
沙门氏菌病是指由各种类型沙门氏菌所引起的人与动物的疾病的总称。我国大陆地区的细菌性食物中毒事件以沙门氏菌病为主。其中，鼠伤寒杆菌沙门氏菌病属于人畜共患病，人和动物在被感染后可能呈现无症状带菌的状态，会表现为有临床症状的致死疾病，也可能会加重死亡率或极大地降低动物的繁殖力。
沙门氏菌不易在水中繁殖，但可以在水中存活二到三周，在粪便中可以存活一到两个月，而在冰箱中可以存活三道四个月。三十七摄氏度是沙门氏菌最适合繁殖的环境温度，沙门氏菌只要温度在二十摄氏度以上就能大量的繁殖，由此可见，低温储藏食品是一项避免沙门氏菌污染的重要措施。沙门氏菌病主要通过污染蛋类、肉类食品以及在食品的加工、运输、出售过程中发生污染来进行传播。沙门氏菌的血清型和食用者的身体状况这两方面的因素是决定是否感染的关键，老人和孩子及具有免疫缺陷的个体受到沙门氏菌病感染的威胁最大。我们必须对容易受到沙门氏菌污染的食品进行相应的分类管理，可以避免大多数的食物在加工及运输过程中被沙门氏菌污染，进而能够有效地预防沙门氏菌病的发生。
2.免疫金渗滤试验技术
免疫金渗滤试验（GIFA）发展于上个世纪九十年代。它是一种用胶体金作为标记物的快速免疫结合的分析技术，具有简单、快速、省时省力、结果直观的优点，从而得到了广泛的发展和应用。本文接下来论述了免疫金渗滤技术的试验原理和操作要点。
2.1免疫金渗滤试验的概念
通常在固相膜的免疫测定中，穿流形式的称为免疫渗滤实验。胶体金也被称为金溶胶，是一种由金盐被还原成金原子从而形成的金颗粒悬液。胶体金颗粒对蛋白质吸附较强，并且不会被蛋白质破坏它的生物活性，它可以与蛋白质（例如葡萄球菌A蛋白、免疫球蛋白）等相结合，进而形成胶体金的标记物。
2.2免疫金渗滤技术的试验原理
本试验是在用硝酸纤维素膜作为吸收的载体，渗滤装置包被了抗原或抗体，然后依此滴加待测标本、免疫金试剂及洗涤液。若标本中含有待测抗原，溶液在流过渗滤装置时会与膜上的抗原或抗体发生快速的结合，若发生胶体金聚集从而在膜上呈现红色斑点的现象则说明为阳性，以此来达到快速检测的要求。
2.3免疫金渗滤技术的操作要点
1）先将渗滤装置平放在实验台上，在小孔中央滴加一到二滴的待测标本，等待溶液充分渗透；
2）再在小孔中央滴加一到二滴的免疫金试剂，等待溶液充分渗透；
3）然后再在小孔中央滴加一到二滴的洗涤液，等待溶液充分渗透；
4）最后观察膜中央的现象，若膜中央显示清晰的淡红色或红色斑点则可判断呈阳性，反之呈阴性，也可由红色的深浅来判断阳性程度。
3.用免疫金渗滤技术检测食品中的沙门氏菌
免疫金渗滤技术使滴在硝纤维膜上的待测样品，能够与胶体金标记后的兔抗沙门氏菌抗体相结合。若样品中存在着沙门氏菌，则与金标抗原抗体结合时会形成金标抗原抗體复合物，停留在硝酸纤维膜上并显现出淡红或红色，可以观察到明显的检测结果。其具体操作如下：
1）制备抗体
利用耳缘静脉注射免疫兔子，来制备兔抗沙门氏菌的混合抗体。可通过一定时间的间隔与不同的剂量来制备抗体，每间隔四天就注射一次，分别注射剂量为零点五、一、二、四、五、五毫升的沙门氏菌。然后再抽取兔子颈动脉血，分离血清，玻凝试验测其效价一比三千二。分装后放在负二十摄氏度的环境中备用。
2）制备胶体金
通过蒸发水溶解的氯化金，令其浓度达到百分之零点零一。隔水煮沸后，取一百毫升加入浓度为百分之，剂量为二点五毫升的柠檬酸钠，快速搅拌，当溶液呈橘红色后，再继续煮十分钟，最后取出待其冷至室温，这就制成了粒径为十八到二十纳米的胶体金溶胶。
3）制备金标抗体
取五十毫升的胶体金溶胶，再用每摩尔零点二毫升的碳酸钾将其的pH值调为九，加入每摩尔零点五毫升的抗体一毫升，搅拌十分钟，再加入浓度为百分之十的牛血清白蛋白使达到百分之一的浓度，继续搅拌十分钟。以每分钟二千转离心二十分钟，摒弃沉淀上清，再以每分钟一万转离心六十分钟，吸去上清，此时的沉淀即为初纯的金标抗体。在进行两次的沉淀悬浮离心洗涤完毕后，再在pH值为七点四的磷酸缓冲液中重新进行悬浮，最后放到四摄氏度的环境下备用。
4）组装检测盒
取直径五厘米高一厘米的塑料盒，在顶盖上开孔，一个直径为一点二里面的大孔位于中央，三个直径为零点六厘米的小孔呈三角形分布。盒中装有吸水垫料，最上面装直径为二点五厘米的微孔滤膜。
5）处理待测样品
选择已切碎的不同肉类生熟各一份，将培养皿放到三十七摄氏度的温箱培养十八小时，然后分别取十克放到另一个培养皿中，再加入九十毫升的生理盐水，震荡后静置，再取上层液用于检测，并利用琼脂倾注法统计细菌的总数。
6）金标抗体检测方法
在小孔中央加入10Ll/100Ll（小孔/大孔，下同）的待测样品，等待溶液充分渗透；然后加入20Ll/100Ll的封闭剂，等待溶液充分渗透；再加入30Ll/150Ll的洗涤液，等待溶液充分渗透；最后加入10Ll/100Ll的金标抗体，等待溶液充分渗透。如在小孔中央的膜上出现红色斑点为阳性。
本实验中显示颗粒性抗原（菌悬液）可不经过特殊处理，就能被多孔滤膜所吸附，进而与金标抗体结合而显色。若经过简单的浓集处理，其检测的灵敏度也将变高。
4.结束语
本文所采用的免疫金渗滤法具有操作简单快速、不需要特殊的检测仪器设备以及试剂稳定且易保存的特点，已成为目前临床检验的主要方法之一。但是由于免疫金渗透技术不能够准确的定量，所以临床上只能作为定性或半定量试验。本文重点研究了免疫金渗滤试验技术对人工染菌（沙门氏菌）的食品进行现场检测的内容，希望能对生活中染上沙门氏菌病的食物中毒人群有所帮助。
参考文献：
[1]孔繁德.沙门氏菌快速检测体系的建立与应用及其耐药性分析研究[D].南京农业大学.2006，12（24）：152-155
[2]王中民，李君文，王新为，宋农，郑金来，辛忠涛，靳连群.免疫金渗滤试验检测食品中沙门氏菌的研究[J].微生物学免疫学进展.2001，12（24）：162-166
[3]任秀.食品中沙门氏菌快速检测方法的研究[D].吉林大学.2011，12（24）：141-145
[4]王中民，王育兵，田葆萍，毛彦杰，石静.免疫金渗滤试验检测食品中大肠杆菌的研究[J].实用预防医学.2007，12（24）：126-129
【关键词】 免疫金渗滤试验技术；食品检测；沙门氏菌
引言：
我们所说的食物中毒是指摄入了含生物性与化学性有毒有害的食品，出现的急性或亚急性疾病。根据国内外的统计，在多种类型的食物中毒事件中，最常见的类型是细菌性的食物中毒。细菌性的食物中毒在全世界的许多国家都是一项值得我们注意的公共卫生问题。在我国，每年发生的细菌性食物中毒事件占所有食物中毒事件总数的比例约为百分之三十到九十。其中，沙门氏菌是引起人们食物中毒和疾病扩散的主要病原菌之一，食源性的疾病对人们的健康产生了严重的威胁，必须引起所有人的广泛重视。
1.沙门氏菌的概念
沙门氏菌是沙门氏菌病的病原体。沙门氏菌属肠杆菌科，目前已发现的菌种约有一千种。沙门氏菌具有菌体抗原、鞭毛抗原和表面抗原共三种抗原结构。观察菌种的抗原成分，可将沙门氏菌分为甲、乙、丙、丁、戊等五个基本菌组。沙门氏菌属有的只能够引起人类的疾病，有的只能够引起动物的疾病，也有的能够使得人和动物都致病。而与人体疾病相关的菌组有甲乙丙三组的副伤寒甲、乙、丙杆菌，丁组的伤寒杆菌，乙组的鼠伤寒杆菌，丙组的猪霍乱杆菌，丁组的肠炎杆菌等。其中伤寒杆菌、副伤寒甲杆菌和副伤寒乙杆菌能够引起人类的疾病，剩下的大多数菌组只能够引起家畜、鼠类和禽类等动物的疾病，但是它们也可以通过污染食物的方式而引起人类的食物中毒。
沙门氏菌病是指由各种类型沙门氏菌所引起的人与动物的疾病的总称。我国大陆地区的细菌性食物中毒事件以沙门氏菌病为主。其中，鼠伤寒杆菌沙门氏菌病属于人畜共患病，人和动物在被感染后可能呈现无症状带菌的状态，会表现为有临床症状的致死疾病，也可能会加重死亡率或极大地降低动物的繁殖力。
沙门氏菌不易在水中繁殖，但可以在水中存活二到三周，在粪便中可以存活一到两个月，而在冰箱中可以存活三道四个月。三十七摄氏度是沙门氏菌最适合繁殖的环境温度，沙门氏菌只要温度在二十摄氏度以上就能大量的繁殖，由此可见，低温储藏食品是一项避免沙门氏菌污染的重要措施。沙门氏菌病主要通过污染蛋类、肉类食品以及在食品的加工、运输、出售过程中发生污染来进行传播。沙门氏菌的血清型和食用者的身体状况这两方面的因素是决定是否感染的关键，老人和孩子及具有免疫缺陷的个体受到沙门氏菌病感染的威胁最大。我们必须对容易受到沙门氏菌污染的食品进行相应的分类管理，可以避免大多数的食物在加工及运输过程中被沙门氏菌污染，进而能够有效地预防沙门氏菌病的发生。
2.免疫金渗滤试验技术
免疫金渗滤试验（GIFA）发展于上个世纪九十年代。它是一种用胶体金作为标记物的快速免疫结合的分析技术，具有简单、快速、省时省力、结果直观的优点，从而得到了广泛的发展和应用。本文接下来论述了免疫金渗滤技术的试验原理和操作要点。
2.1免疫金渗滤试验的概念
通常在固相膜的免疫测定中，穿流形式的称为免疫渗滤实验。胶体金也被称为金溶胶，是一种由金盐被还原成金原子从而形成的金颗粒悬液。胶体金颗粒对蛋白质吸附较强，并且不会被蛋白质破坏它的生物活性，它可以与蛋白质（例如葡萄球菌A蛋白、免疫球蛋白）等相结合，进而形成胶体金的标记物。
2.2免疫金渗滤技术的试验原理
本试验是在用硝酸纤维素膜作为吸收的载体，渗滤装置包被了抗原或抗体，然后依此滴加待测标本、免疫金试剂及洗涤液。若标本中含有待测抗原，溶液在流过渗滤装置时会与膜上的抗原或抗体发生快速的结合，若发生胶体金聚集从而在膜上呈现红色斑点的现象则说明为阳性，以此来达到快速检测的要求。
2.3免疫金渗滤技术的操作要点
1）先将渗滤装置平放在实验台上，在小孔中央滴加一到二滴的待测标本，等待溶液充分渗透；
2）再在小孔中央滴加一到二滴的免疫金试剂，等待溶液充分渗透；
3）然后再在小孔中央滴加一到二滴的洗涤液，等待溶液充分渗透；
4）最后观察膜中央的现象，若膜中央显示清晰的淡红色或红色斑点则可判断呈阳性，反之呈阴性，也可由红色的深浅来判断阳性程度。
3.用免疫金渗滤技术检测食品中的沙门氏菌
免疫金渗滤技术使滴在硝纤维膜上的待测样品，能够与胶体金标记后的兔抗沙门氏菌抗体相结合。若样品中存在着沙门氏菌，则与金标抗原抗体结合时会形成金标抗原抗體复合物，停留在硝酸纤维膜上并显现出淡红或红色，可以观察到明显的检测结果。其具体操作如下：
1）制备抗体
利用耳缘静脉注射免疫兔子，来制备兔抗沙门氏菌的混合抗体。可通过一定时间的间隔与不同的剂量来制备抗体，每间隔四天就注射一次，分别注射剂量为零点五、一、二、四、五、五毫升的沙门氏菌。然后再抽取兔子颈动脉血，分离血清，玻凝试验测其效价一比三千二。分装后放在负二十摄氏度的环境中备用。
2）制备胶体金
通过蒸发水溶解的氯化金，令其浓度达到百分之零点零一。隔水煮沸后，取一百毫升加入浓度为百分之，剂量为二点五毫升的柠檬酸钠，快速搅拌，当溶液呈橘红色后，再继续煮十分钟，最后取出待其冷至室温，这就制成了粒径为十八到二十纳米的胶体金溶胶。
3）制备金标抗体
取五十毫升的胶体金溶胶，再用每摩尔零点二毫升的碳酸钾将其的pH值调为九，加入每摩尔零点五毫升的抗体一毫升，搅拌十分钟，再加入浓度为百分之十的牛血清白蛋白使达到百分之一的浓度，继续搅拌十分钟。以每分钟二千转离心二十分钟，摒弃沉淀上清，再以每分钟一万转离心六十分钟，吸去上清，此时的沉淀即为初纯的金标抗体。在进行两次的沉淀悬浮离心洗涤完毕后，再在pH值为七点四的磷酸缓冲液中重新进行悬浮，最后放到四摄氏度的环境下备用。
4）组装检测盒
取直径五厘米高一厘米的塑料盒，在顶盖上开孔，一个直径为一点二里面的大孔位于中央，三个直径为零点六厘米的小孔呈三角形分布。盒中装有吸水垫料，最上面装直径为二点五厘米的微孔滤膜。
5）处理待测样品
选择已切碎的不同肉类生熟各一份，将培养皿放到三十七摄氏度的温箱培养十八小时，然后分别取十克放到另一个培养皿中，再加入九十毫升的生理盐水，震荡后静置，再取上层液用于检测，并利用琼脂倾注法统计细菌的总数。
6）金标抗体检测方法
在小孔中央加入10Ll/100Ll（小孔/大孔，下同）的待测样品，等待溶液充分渗透；然后加入20Ll/100Ll的封闭剂，等待溶液充分渗透；再加入30Ll/150Ll的洗涤液，等待溶液充分渗透；最后加入10Ll/100Ll的金标抗体，等待溶液充分渗透。如在小孔中央的膜上出现红色斑点为阳性。
本实验中显示颗粒性抗原（菌悬液）可不经过特殊处理，就能被多孔滤膜所吸附，进而与金标抗体结合而显色。若经过简单的浓集处理，其检测的灵敏度也将变高。
4.结束语
本文所采用的免疫金渗滤法具有操作简单快速、不需要特殊的检测仪器设备以及试剂稳定且易保存的特点，已成为目前临床检验的主要方法之一。但是由于免疫金渗透技术不能够准确的定量，所以临床上只能作为定性或半定量试验。本文重点研究了免疫金渗滤试验技术对人工染菌（沙门氏菌）的食品进行现场检测的内容，希望能对生活中染上沙门氏菌病的食物中毒人群有所帮助。
参考文献：
[1]孔繁德.沙门氏菌快速检测体系的建立与应用及其耐药性分析研究[D].南京农业大学.2006，12（24）：152-155
[2]王中民，李君文，王新为，宋农，郑金来，辛忠涛，靳连群.免疫金渗滤试验检测食品中沙门氏菌的研究[J].微生物学免疫学进展.2001，12（24）：162-166
[3]任秀.食品中沙门氏菌快速检测方法的研究[D].吉林大学.2011，12（24）：141-145
[4]王中民，王育兵，田葆萍，毛彦杰，石静.免疫金渗滤试验检测食品中大肠杆菌的研究[J].实用预防医学.2007，12（24）：126-129