基于Gateway^TM系统Dec1慢病毒表达载体的构建

来源 :中华神经外科疾病研究杂志 | 被引量 : 0次 | 上传用户:caojiangtao007
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目的利用Gateway^TM技术构建分化型胚胎软骨发育基因1(Dec1)的慢病毒表达载体并建立稳定表达该目的基因的人胶质瘤U87细胞株。方法从人脑胶质瘤组织中提取总RNA,经反转录得到目的cDNA。设计含有特异性酶切位点的引物,通过逆转录酶一多聚酶链反应(1iT—PCR),获得用于重组的Dec1目的基因全长。将目的片段克隆至入门载体(pENTR^TM3C)中产生入门克隆。利用Gateway^TM技术,将入门克隆中的目的片段转接于目的载体(pLenti6.3/V5-DEST)中产生表达克隆pLenti6.3
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