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【目的】克隆构建黄曲霉毒素B1（AFB1）单链抗体（scFv）基因，并对其编码蛋白序列和结构进行分析预测，为scFv分子修饰改造及在免疫学检测中的应用提供参考依据。【方法】以抗AFB1单克隆抗体杂交瘤细胞株为原料，通过PCR扩增重链可变区（VH）和轻链可变区（VL），以（Gly4Ser）3为柔性接头（Linker）拼接构建抗AFB1scFv基因，并采用在线生物信息学分析软件对其氨基酸序列、理化性质及蛋白结构进行分析预测。【结果】抗AFB1scFv基因全长744bp，编码248个氨基酸，分子量为26312.