【摘 要】
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目的 探讨人诱导性多能干细胞（hiPSCs）向多巴胺能神经前体细胞（DAPs）的定向分化对细胞增殖和迁移的影响，为优化诱导分化方案和细胞移植治疗提供新思路。方法 hiPSCs的诱导分化分为实验组（Exp）和对照组（Cont）。实验组的诱导分化方案是在基础诱导培养基上添加3个信号通路的激活剂或抑制剂，对照组则仅使用基础诱导培养基。通过实时荧光定量PCR（qPCR）和免疫荧光检测诱导分化第0、7、14
【基金项目】
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国家自然科学基金项目（81871004）； 广州医科大学十四五高峰学科建设项目-广州市科技创新团队培育项目（06-410-2107295）； 广东省医学科研基金（A2022137）；
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目的 探讨人诱导性多能干细胞（hiPSCs）向多巴胺能神经前体细胞（DAPs）的定向分化对细胞增殖和迁移的影响，为优化诱导分化方案和细胞移植治疗提供新思路。方法 hiPSCs的诱导分化分为实验组（Exp）和对照组（Cont）。实验组的诱导分化方案是在基础诱导培养基上添加3个信号通路的激活剂或抑制剂，对照组则仅使用基础诱导培养基。通过实时荧光定量PCR（qPCR）和免疫荧光检测诱导分化第0、7、14天的细胞多能性标志物NANOG、OCT4和SOX2，细胞增殖标志物KI67，神经干细胞（NSCs）标志物NESTIN，底板标志物FOXA2和DAPs标志物EN1、LMX1A、MSX1的表达；CCK8和划痕实验分别检测细胞增殖和迁移能力。结果 qPCR结果显示，在诱导分化过程中，对照组和实验组的多能性基因NANOG的表达均下降，且实验组下降趋势更明显（D7:P=0.0019,D14:P=0.0001）。与对照组相比较，实验组第7天和第14天NESTIN、EN1、LMX1A和MSX1的mRNA水平表达均明显增加（NESTIN:P=0.0043;EN1:P=0.0002、LMX1A:P=0.0142、MSX1;P=0.0233）。免疫荧光染色结果表明，两组未诱导的hiPSCs均大量表达NANOG、OCT4、SOX2和KI67；第7天，实验组细胞大量表达FOXA2/NESTIN双阳性，对照组细胞大多仅表达NESTIN阳性；第14天，实验组大量表达EN1、LMX1A、MSX1，而对照组表达较少；CCK8增殖实验结果显示，第7天和14天时，实验组的450nm吸光值均高于对照组（D7:P=0.0430;D14:P=0.0001）；划痕实验结果显示，在第7天时，对照组与实验组的划痕愈合趋势的差异无统计学意义（P>0.05），而第14天时，对照组相对于实验组的24 h划痕愈合趋势明显增加（P=0.0023）。结论 诱导分化方案添加的通路激活剂或抑制剂，可以促进hiPSCs向DAPs的分化，在总体水平能够促进细胞增殖，而抑制细胞分化后期的迁移能力。
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