【摘 要】
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目的构建hPlk3真核表达载体并证实融合蛋白在细胞内的表达及定位。方法提取工具细胞Hela的mRNA,反转录为cDNA。PCR扩增hPlk3基因cDNA全长,并将其亚克隆至pEGFP-C1表达载体中
【机 构】
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中国医科大学附属盛京医院骨科; 中国医科大学基础医学院细胞生物学教研室细胞生物学卫生部重点实验室;
【基金项目】
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国家自然科学基金(31201053,81372337)
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目的构建hPlk3真核表达载体并证实融合蛋白在细胞内的表达及定位。方法提取工具细胞Hela的mRNA,反转录为cDNA。PCR扩增hPlk3基因cDNA全长,并将其亚克隆至pEGFP-C1表达载体中。然后将构建的重组质粒进行酶切和测序鉴定,并转染到工具细胞COS-7中,提取细胞蛋白进行Westernblot检测其表达。最后利用激光共聚焦扫描显微镜观察pEGFP-hPlk3在COS-7细胞内的定位。结果hPlk3基因cDNA全长克隆到了真核表达载体pEGFP-C1中,酶切鉴定片段为1941bp,并测序成功。Westernblot检测到了GFP-hPlk3融合蛋白表达,分子量约为98kDa。pEGFP-hPlk3在COS-7细胞中主要定位于细胞质和核周。结论成功构建了hPlk3基因cDNA全长的真核表达载体,pEGFP-hPlk3蛋白在COS-7细胞中主要定位于细胞质和核周。
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