【摘 要】
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目的应用自制梯度浓度混合-程控降温器官灌注仪,灌注羊完整卵巢,并行程序化冷冻,探讨冻融羊完整卵巢的效果并筛选最佳冷冻保护剂组合。方法将收集的28个羊完整卵巢,随机分配
【机 构】
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山东大学齐鲁医院不孕不育诊疗中心; 山东省齐鲁干细胞有限公司; 山东省枣庄市妇幼保健院; 山东大学齐鲁医院低温医学研究室; 山东大学齐鲁医院病理科;
【基金项目】
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国家自然科学基金资助项目(81370711);山东省科技攻关资助项目(2010GSF10814)
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目的应用自制梯度浓度混合-程控降温器官灌注仪,灌注羊完整卵巢,并行程序化冷冻,探讨冻融羊完整卵巢的效果并筛选最佳冷冻保护剂组合。方法将收集的28个羊完整卵巢,随机分配到新鲜对照组(A组)、海藻糖组(B组)、甘油组(C组),二甲基亚砜(DMSO)组(D组)。冻融后组织切片行HE染色及原位缺口末端转移酶标记技术(TUNEL)检测,并通过RT-PCR技术检测组织Bcl-2相关X蛋白(Bax)及冷诱导RNA结合蛋白(CIRP)的mRNA表达。结果 B组正常卵泡形态比率与A组差异无显著性(P>0.05),C组及D组正常形态卵泡比率显著低于A组,差异有统计学意义(P<0.05)。B、C、D 3组冻存组基质细胞密度均低于A组,其中D组最低,差异具有统计学意义(P<0.05)。冻存组中,B组TUNEL反应阳性的细胞数目显著少于C组及D组,差异具有统计学意义(P<0.05),且均显著多于新鲜组。A组及B组bax基因mRNA的表达量明显低于C组及D组(P<0.05);B组CIRP基因mRNA的表达量明显高于C组及D组,差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论羊卵巢整体冻存后可较好保存组织学形态,海藻糖组的冷冻保护剂在组织结构保存及抑制细胞凋亡方面优于甘油组及DMSO组。
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