论文部分内容阅读
目的 初步探讨长链非编码RNA 017418 (lncRNA 017418)和细胞因子在细粒棘球蚴重组蛋白P29 (rP29)诱导小鼠产生免疫反应中的表达. 方法 重组融合表达菌株pET28a-P29/BL21与LB液体培养基混合孵育,加入异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)检测纯化rP29.36只雌性BALB/c小鼠随机分为对照组、佐剂组和免疫组,每组12只,免疫组将纯化的10μgrP29与等体积弗氏完全佐剂混合乳化后,腹部皮下3点注射,总剂量100 μl/鼠,佐剂组注射等体积弗氏完全佐剂,对照组不作处理;首次免疫后2周,相同剂量加强免疫1次,加强免疫采用弗氏不完全佐剂.加强免疫后2周,无菌环境下制备脾细胞悬液,分离淋巴细胞;流式细胞术分选淋巴细胞亚群CD4+T、CD8+T和B淋巴细胞;实时荧光定量PCR (qRT-PCR)检测lncRNA 017418、Notch1、白细胞介素-2(IL-2)、γ干扰素(IFN-γ)、IL-10在淋巴细胞中的表达量;采用SPSS 17.0统计学软件和GraphPad Prism6.0软件对实验结果进行分析. 结果 经IPTG诱导表达、亲和层析法纯化,rP29蛋白相对分子质量(Mr)约为31 000.qRT-PCR检测lncRNA 017418在脾淋巴细胞中的相对表达量,免疫组为2.25±0.10,高于对照组(0.81±0.05)和佐剂组(0.99±0.13) (P＜0.01).流式细胞术分析的CD4+T、CD8+T和B淋巴细胞所占比例分别为:对照组22.0％、9.2％和59.8％,佐剂组22.8％、7.6％和60.7％,免疫组22.1％、9.7％和60.4％.LncRNA 017418在免疫组CD4+T淋巴细胞中的相对表达量为1.49±0.03,高于对照组(0.97±0.02)和佐剂组(1.06±0.10) (P＜ 0.01),LncRNA 017418在免疫组CD8+T细胞中的相对表达量为1.87±0.12,与对照组(2.06±0.14)和佐剂组(2.00±0.09)相比,差异无统计学意义(P＞0.05),LncRNA 017418在免疫组B淋巴细胞中的相对表达量为1.03±0.03,与对照组(0.97±0.07)和佐剂组(1.08±0.12)相比,差异无统计学意义(P＞0.05).Notch1在免疫组CD4+T淋巴细胞中的相对表达量为1.92±0.04,高于对照组(1.10±0.10)和佐剂组(1.20±0.08) (P＜ 0.01),IL-2的相对表达量为1.45±0.07,高于对照组(1.07±0.08)和佐剂组(1.09±0.11) (P＜0.05);IFN-γ的相对表达量为1.51±0.11,高于对照组(0.92±0.05)和佐剂组(1.03±0.14) (P＜ 0.01、0.05);IL-10的相对表达量为0.52±0.01,低于对照组(0.95±0.04)和佐剂组(1.05±0.10) (P＜0.01);对照组和佐剂组比较,差异均无统计学意义(P＞0.05).Pearson相关系数分析lncRNA 017418与Notch1、IL-2、IFN-γ之间存在正相关关系(r=0.824 4、0.590 2、0.841 5,均P＜0.01),与IL-10之间存在负相关关系(r=-0.443 2,P＜0.05). 结论 LncRNA 017418在细粒棘球蚴rP29诱导的小鼠中表达上调,Notch1、IL-2、IFN-γ在CD4+T淋巴细胞中表达上调,IL-10在CD4+T淋巴细胞中表达下调.