【摘 要】
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目的:采用在原核表达系统表达的人白细胞介素31(IL-31)蛋白免疫新西兰兔,制备兔抗人IL-31多克隆抗体.方法:利用IPTG诱导人IL-31在大肠杆菌中表达,纯化人IL-31重组蛋白,免疫新
【机 构】
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563003,遵义医学院附属医院检验科
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目的:采用在原核表达系统表达的人白细胞介素31(IL-31)蛋白免疫新西兰兔,制备兔抗人IL-31多克隆抗体.方法:利用IPTG诱导人IL-31在大肠杆菌中表达,纯化人IL-31重组蛋白,免疫新西兰免制备抗人IL-31多克隆抗体.Western-blot鉴定抗体的特异性,ELISA法测定抗体效价.荧光定量PCR检测多克隆抗体对IL-31诱导趋化因子巨噬细胞炎性蛋白3β(macrophage inflammatory protein 3β,MIP-3β)分泌的阻断效应.结果:人IL-31经异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导后可在大肠杆菌中大量表达,表达量占细菌总蛋白的30%,纯化后的蛋白纯度高.IL-31重组蛋白免疫新西兰兔,通过抗体效价测定,获得了效价达1:2 560的多克隆抗体,可阻断IL-31刺激的MIP-3β的分泌.结论:原核表达的人IL-31蛋白能刺激家兔产生抗体,其多克隆抗体的效价高,具有阻断IL-31作用的生物学活性.
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