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目的
探讨体外采用无血清化学成分确定培养基诱导人多能干细胞(human pluripotent stem cell，hPSC)分化为血管平滑肌细胞的优化方案。
方法hPSC(H1/H9胚胎干细胞及诱导多能干细胞)采用无血清、化学成分确定的培养基进行单层培养，并依据诱导分化所使用的生长因子不同分为两组：A组采用骨形态蛋白4(BMP4)＋激活素A(Activin A)；B组采用BMP4＋Activin A＋Wnt信号通路激活剂CHIR99021。在两组干细胞诱导分化后的第9天，流式分选获取的CD31＋、CD34＋血管前体细胞，并经PDGF-BB定向诱导分化为血管平滑肌细胞。采用免疫荧光染色及实时定量荧光聚合酶链式反应(real-time QPCR)对分化获取的细胞进行表型鉴定。
结果流式分选结果显示，B组诱导方案应用于3种多能干细胞时能获得38.8%～51.4%的CD31＋、CD34＋血管前体细胞，显著高于A组诱导方案的11.7%～22.5%(P<0.05)。两种诱导方案获得的血管前体细胞经定向诱导分化后，免疫荧光染色及real-time QPCR检测显示所有分化细胞均具有SM22-α、SMA-α、Calponin等肌源性标志的表达。
结论在采用无血清化学成分确定培养基培养条件下，同时激活BMP及Wnt信号通路可稳定、高效地将hPSC细胞诱导分化为血管平滑肌细胞，从而有望为细胞移植治疗提供"临床应用级别"的种子细胞。