论文部分内容阅读
目的 研究盐霉素抑制大鼠肝星状细胞胶原蛋白合成的作用机制.方法 体外培养大鼠肝星状细胞(HSC-T6),以酶联免疫吸附(ELISA)法检测HSC-T6上清液中Ⅰ型(ColⅠ)和Ⅲ型(ColⅢ)胶原蛋白的分泌,以实时定量聚合酶链反应(Real time-PCR)和蛋白质印迹(Western blot)法检测Wnt/β-连环蛋白(β-catenin)通路下游蛋白β-catenin、cyclinD1的表达,以荧光素酶报告基因检测β-catenin/T细胞因子(TCF)的转录活性.结果 ELISA结果显示,低、中、高浓度实验组ColⅠ水平分别为6.68±0.57,4.15±0.61,3.02±0.42,ColⅢ水平分别为5.61±0.55,3.19±0.43,2.28±0.36,且呈现浓度依赖性,而对照组ColⅠ和ColⅢ的水平分别为5.42±0.53,4.59±0.49,差异均有统计学意义(均P<0.05).Real time-PCR和Western blot检测结果显示,盐霉素能显著下调Wnt/β-catenin通路下游β-catenin、cyclinD1蛋白的表达,且呈浓度依赖性,高浓度盐霉素抑制作用大于秋水仙碱(均P<0.05).实验组TOPFlash报告基因荧光素酶活性显著下降,且在高浓度实验组下降最为显著(均P<0.05),提示盐霉素能显著下调β-catenin/TCF转录活性,且呈浓度依赖性,而秋水仙碱下调β-catenin/TCF转录活性强度大于高浓度实验组(P<0.05).结论 盐霉素通过下调Wnt/β-catenin通路活性抑制HSC-T6的胶原蛋白合成,从抑制肝纤维化,且抗纤维化效果优于秋水仙碱组.