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目的
筛选鉴定针对HIV-1 vpr基因的小干扰RNA(siRNA)干扰片段，探讨siRNA对HIV-1 vpr基因的干扰效率。
方法根据siRNA设计要求合成针对HIV-1 vpr靶点的2段寡核苷酸片段，并构建相应载体，转染含HIV-1 vpr质粒的HEK293T细胞。设2个实验组(siRNA56、siRNA160组)，1个阴性对照组(NC组)，空白HEK293T细胞为对照组(Con组)。各组分别进行总RNA、蛋白提取，实时PCR和蛋白质印迹分别从核酸和蛋白水平验证有效的靶向HIV-1 vpr的siRNA片段。ELISA检测各组培养细胞上清液中IL-17、γ干扰素水平。
结果DNA测序结果表明成功构建了哺乳动物细胞pRNAT-U6.1/Neo-Vpr-56/160(siRNA56和siRNA160)表达载体。siRNA56和siRNA160干扰使HIV-1 vpr基因在mRNA水平的表达分别下降69.0%和76.1%；在蛋白表达水平分别下降76.3%和86.5%。Con组、NC组、siRNA56组和siRNA160组细胞培养上清液中IL-17分别为(1.936±0.415)、(1.815±0.393)、(1.935±0.356)和(2.034±0.421) pg/mL；γ干扰素分别为(1.673±0.234)、(1.648±0.332)、(2.169±0.362)和(2.301±0.4125) pg/mL。
结论表达pRNAT-U6.1/Neo-vpr-56/160(siRNA56和siRNA160)的质粒构建成功，针对不同基因片段的siRNA均可以下调HIV-1 vpr的表达水平。