河北省奶牛场牛呼吸道疾病综合征病原分离鉴定

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为了分离与鉴定河北省奶牛场牛呼吸道疾病综合征(bovine respiratory disease complex,BRDC)病原,自河北省张家口、秦皇岛、保定、衡水、沧州、石家庄、邯郸等地区规模化奶牛场采集奶牛呼吸道疾病临床病例鼻拭子样品及死亡奶牛的肺脏组织样品,用牛传染性鼻气管炎病毒(infectious bovine rhinotracheitis virus,IBRV)、牛呼吸道合胞体病毒(bovine respiratory syncytial virus,BRSV)、牛副流感病毒3型(bovine parainfluenza virus stype 3,BPIV3)、牛冠状病毒(bovine coronavirus,BCoV)、牛病毒性腹泻病毒(bovine viral diarrhoea virus,BVDV)基因特异性引物进行 PCR扩增,初筛阳性的样品进行病毒分离鉴定.用多杀性巴氏杆菌(Pasteurellamultocida,Pm)、肺炎克雷伯杆菌(Kleb-siellapneumoniae,Kp)、牛支原体(Mycoplasma bovis,MYPB)和溶血性曼氏杆菌(Mannheimiahaemolytica,Mh)基因特异性引物对所采集样品进行PCR扩增,将初筛阳性样品进行细菌分离鉴定、致病性及药物敏感试验.结果显示,分离出BVDV和IBRV,分别命名为HB-BDZ和HB-XTZ.BVDV分离毒HB-BDZ株E0基因序列与GenBank中发表的其他毒株的同源性为80.5%~99.2%,IBRV分离株HB-XTZ与GenBank其他IBRV参考株gB基因核苷酸同源性为93.8%~100%,同源性分析结果进一步表明,分离毒为BVDV和IBRV.系统发育分析结果显示,分离毒株 HB-BDZ 与 HB-DCZ 株(JX046799.1)、JL-1 株(KF501393.1)、国外毒株 Powder 株(JN380089.1)的遗传距离较近,与国内毒株HB-DCZ株同属于Ib亚型.分离株HB-XTZ株与国内XT-IBRV(MF287966)亲缘关系最近,与BHV1.1USA株(KJ652515)和BH80株(AY745877)遗传距离相对较近,而与其他毒株遗传距离较远.利用绵羊血琼脂平板培养基和麦康凯培养基分离出Pm、Kp等2种致病菌,通过生化鉴定和PCR鉴定进一步确定分离菌为Pm、Kp.序列测定及分析结果显示,Pm分离株kmt基因与GenBank其他参考菌株核苷酸序列的同源性为96.4%~100%,与MH06873.1的亲缘关系最近.Kp分离株phoE基因核苷酸序列与GenBank其他参考菌株的同源性为96.5%~99.5%,与AF064793.1的亲缘关系最近.Pm、Kp分离菌均对小鼠具有较强的致病性.所有的分离株均表现出不同程度的耐药,Pm的分离株对环丙沙星、氧氟沙星、氟苯尼考、阿米卡星4种抗生素敏感;Kp的分离株对氧氟沙星、阿米卡星、新霉素3种抗生素中度敏感.
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