【摘 要】
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目的 建立稳定表达HBV X蛋白(HBx)的LX-2细胞系,并初步研究HBx对于肝星形细胞(HSC)的增殖及其Ⅰ型胶原蛋白表达的影响.方法 构建包含HBx基因的重组慢病毒载体LV5-X,并转染LX-2细胞,同时用对照质粒转染LX-2细胞,经嘌呤霉素筛选后获得HBx稳定表达的LX-2-X和对照LX-2-C细胞系.荧光显微镜下观察感染效率,Western印迹检测细胞株中HBx的表达.在LX-2细胞系的
【机 构】
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210029南京医科大学第一附属医院感染病科,210003南京医科大学第二附属医院消化内科,210029南京医科大学第一附属医院感染病科,210029南京医科大学第一附属医院感染病科,210029南京
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目的 建立稳定表达HBV X蛋白(HBx)的LX-2细胞系,并初步研究HBx对于肝星形细胞(HSC)的增殖及其Ⅰ型胶原蛋白表达的影响.方法 构建包含HBx基因的重组慢病毒载体LV5-X,并转染LX-2细胞,同时用对照质粒转染LX-2细胞,经嘌呤霉素筛选后获得HBx稳定表达的LX-2-X和对照LX-2-C细胞系.荧光显微镜下观察感染效率,Western印迹检测细胞株中HBx的表达.在LX-2细胞系的生物学特性探索方面,应用CCK-8法检测细胞的增殖;Real-time PCR检测细胞中Ⅰ型胶原蛋白mRNA的表达;ELISA法检测细胞培养上清中Ⅰ型胶原蛋白的表达.结果 成功构建重组慢病载体LV5-X,感染LX-2细胞后建立细胞系LX-2-X和LX-2-C,嘌呤霉素筛选3d后,荧光显微镜显示近100％细胞发出绿色荧光,Western印迹证实LX-2-X细胞稳定表达HBx.培养72 h和96 h后LX-2-X细胞增殖明显高于LX-2和LX-2-C细胞组(P＜0.05);PCR证实LX-2-X细胞Ⅰ型胶原蛋白mRNA合成高于LX-2和LX-2-C细胞组(P＜0.05);ELISA结果显示LX-2-X细胞Ⅰ型胶原蛋白表达高于LX-2和LX-2-C细胞组(P＜0.05).结论 成功构建了稳定表达HBx的LX-2细胞系;HBx能够促进HSC的增殖,并增加Ⅰ型胶原蛋白的表达。
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