【摘 要】
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目的 克隆表达我国深圳地区粉尘螨Ⅰ类变应原Der f 1基因,并进行该基因的多态性分析和鉴定该纯化蛋白的变应原性,为研究具有我国区域特色的粉尘螨变应原奠定基础.方法 从深圳
【机 构】
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深圳大学生命科学学院,深圳,518060
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目的 克隆表达我国深圳地区粉尘螨Ⅰ类变应原Der f 1基因,并进行该基因的多态性分析和鉴定该纯化蛋白的变应原性,为研究具有我国区域特色的粉尘螨变应原奠定基础.方法 从深圳地区挑取经形态鉴定的活粉尘螨,提取总RNA,RT-PCR扩增Der f 1基因,克隆到T载体测序确认.通过计算机软件进行该基因的多态性分析.将该目的基因克隆到pET-His表达载体上得到重组质粒pET-Der f 1.工程菌经IPTG诱导培养,表达Der f 1目的蛋白.重组Der f1蛋白通过6His-tag蛋白纯化系统进行分离、纯化,并进行Western-Blot检测纯化的Der f 1蛋白与粉尘螨过敏病人血清中IgE的反应性,以鉴定重组Der f 1的变应原性.结果 以粉尘螨总RNA为模板,经RT-PCR从深圳地区克隆了4株Der f 1基因.该基因与GenBank公布的Der f 1(No.AB034946.1)比较发现核苷酸的同源性在99.48%～100%之间,理论推导的氨基酸序列同源性在99.69%～100%之间.工程菌经IPTG诱导后高效表达的Der f 1重组蛋白,并主要以包涵体形式存在.Western-Blot试验证实该4株Der f 1基因表达的重组蛋白都具有变应原性.结论 本研究克隆了4株深圳地区粉尘螨Ⅰ类过敏原基因并实现了原核表达,为进一步开展Der f 1蛋白研究和重组变应原免疫治疗疫苗研究奠定基础.
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