【摘 要】
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目的 研究小同功型人硒蛋白P(HSelP)的作用。方法 克隆HSelP小同功型基因,将位于N端40位的硒半胱氨酸(SeCys)突变为半胱氨酸,测序确定后,在感受态大肠杆菌BL21中大量表达,表达产物HSelP280m用阴离子交换层析纯化,Western blot方法鉴定。提取小鼠肝细胞线粒体,通过荧光光谱仪检测线粒体悬液90°光散射强度和罗丹明123荧光光度变化,确定不同浓度HSelP280m引起
【机 构】
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中国医学科学院中国协和医科大学肿瘤研究所分子肿瘤学国家重点实验室,北京100021,中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所肝炎室,中国科学院动物研究所生物膜与膜生物工程国家重点实验室,中国科学院动物研究
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目的 研究小同功型人硒蛋白P(HSelP)的作用。方法 克隆HSelP小同功型基因,将位于N端40位的硒半胱氨酸(SeCys)突变为半胱氨酸,测序确定后,在感受态大肠杆菌BL21中大量表达,表达产物HSelP280m用阴离子交换层析纯化,Western blot方法鉴定。提取小鼠肝细胞线粒体,通过荧光光谱仪检测线粒体悬液90°光散射强度和罗丹明123荧光光度变化,确定不同浓度HSelP280m引起的线粒体膜透过性转运孔(PIP)开放程度和线粒体跨膜电位的变化。结果 成功地将HSelP小同功型中SeCys点突变为半胱氨酸,在原核表达系统中获得大量表达。表达产物纯化后纯度达90%以上。HSelP280m可促进线粒体PTP开放,跨膜电位下降,且有剂量依赖关系,可被PTP的特异抑制剂所抑制。此作用在去除N端40个氨基酸后丧失。结论 HSelP280m有促进线粒体PTP开放的作用,为进一步研究HSelP的结构和功能提供了线索。
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