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目的
建立一种可以用于支原体、细菌等原核生物感染的快速诊断方法。
方法根据原核生物16S rDNA独特的序列特性,通过聚合酶链反应(PCR)扩增16S rDNA,扩增产物与结合在酶联免疫吸附反应(ELISA)板上的特异性探针杂交,经酶显色,计算吸光度比值来检测标本。以肺炎支原体为例,对上述方法进行了特异性、重复性、敏感性等方面的检验。
结果(1)多种原核生物均可扩增出16S rDNA;(2)各种原核生物的16S rDNA片断仅与其特异性探针杂交;(3)经3次重复杂交试验结果均相同;(4)对肺炎支原体感染流行期所取标本进行对照检验,PCR-ELISA方法检出率与传统PCR方法差异无显著意义。
结论利用原核生物16S rDNA序列特性的PCR-ELISA方法具有特异性高、重复性好、灵敏度高等优点,是一种可检测原核生物感染的快速诊断方法。