【摘 要】
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目的:构建人钙调素(CaM)基因表达载体并在大肠杆菌DH5α中高效表达人CaM蛋白.方法:用PCR方法获得人钙调素基因Ⅲ(hCaMⅢ cDNA),将其插入表达载体pBV220,构建重组表达质粒hCaM
【机 构】
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南京军区南京总医院全军医学检验中心免疫室
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目的:构建人钙调素(CaM)基因表达载体并在大肠杆菌DH5α中高效表达人CaM蛋白.方法:用PCR方法获得人钙调素基因Ⅲ(hCaMⅢ cDNA),将其插入表达载体pBV220,构建重组表达质粒hCaMⅢ/pBV220,用酶切、DNA测序、PCR扩增鉴定阳性克隆.结果:阳性重组子在大肠杆菌DH5α中经温度诱导可高效表达CaM蛋白,经15%SDS-PAGE分析,可观察到一分子量与理论值相符(约17 kD)的诱导表达条带,其表达量占菌体蛋白总量的20%.进一步分析表达产物的性质表明,CaM主要以可溶性形式表达.Western blot结果证实,17 kD的表达条带可与标准鼠抗CaM McAb起特异反应.结论:用基因工程技术在大肠杆菌中高效表达人CaM,为进一步研究CaM的生物学功能及研制抗CaM单克隆抗体奠定基础.
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