【摘 要】
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目的:探讨利用基因工程技术制备神经营养素-3(Neurotrophin-3,NT-3)的方法.方法:根据NT3cDNA序列设计一对引物,采用聚合酶链反应,扩增编码人NT-3基因,通过基因重组,构建表达
【机 构】
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蚌埠医学院临床生化教研室,中山医科大学解剖学教研室
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目的:探讨利用基因工程技术制备神经营养素-3(Neurotrophin-3,NT-3)的方法.方法:根据NT3cDNA序列设计一对引物,采用聚合酶链反应,扩增编码人NT-3基因,通过基因重组,构建表达载体PBV220-NT-3.自动序列分析测定TN-3序列.将重组PBV220-NT-3转化到大肠杆菌DH5a中,温度诱导目的基因表达.透视电镜观察诱导后的工程菌.薄层凝胶扫描分析目的基因表达量.Western blot鉴定其免疫活性.结果:序列分析结果与文献报道一致;目的基因在温度诱导下表达量为25%,表达产物以包涵体形式存在于工程菌菌体两端,大小不一;Western blot阳性.结论:本实验利用基因工程技术制备NT-3是可行的,且表达量为25%,表达产物具有免疫活性,为进一步研究其生物学功能奠定基础.
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