论文部分内容阅读
作者简介：张静（1981.8- ）女，满族，河南商丘人，上海现代哈森（商丘）药业有限公司化验员，研究方向：液相。摘要： 有关物质检测是对药品中残留合成原料、中间体、副产物及可能的降解产物的检测，是对药品质量控制的一项重要指标，目的是根据安全性的要求检测药品中所含上述杂质是否符合标准。下面就工作中遇到的一些问题以及我们的一些解决办法与大家交流一下。
关键词：HPLC；药品有关物；残留检测
【中图分类号】R453【文献标识码】 A【文章编号】1002-3763（2014）09-0109-021 关于药品中有关物质残留检查研究的一点建议：
1.1 有关物质检查常用的方法是主成分自身对照法和已知杂质对照品比较法。对于主成分自身对照法，采用此方法时确定的检测波长是否合理直接影响到方法的可行性，因此，检测波长的选择是方法学研究的重要内容。
1.2 我们认为一些药物采用HPLC主成分自身对照法检查有关物质时直接以主成分的最大吸收波长为检测波长不合理。
2 现行标准中遇到的问题
日常工作中我们常遇到的问题主要有：杂质峰和辅料峰不好界定；理论板数要求过高；关于溶剂峰；其它干扰；药品标准中规定的保留时间不够。
2.1 理论板数问题：例如：对乙酰氨基酚有关物质检查是用对氨基酚作杂质对照品，对氨基酚保留时间为6分钟，对乙酰氨基酚的保留时间为15分钟，两者分离度在10以上，但由于对乙酰氨基酚的进样量过大，所以理论板数达不到要求的5000，更换多支柱子仍达不到，但样品浓度在含量測定下时理论板数达6000以上。我们认为本法只测定对氨基酚，只要两者的分离度达到要求就可以，而样品峰的理论板数与测定无关。
2.2 关于溶剂峰：在有关物质检查时往往会出现溶剂峰，特别是低波长测定时溶剂峰更大，这样会使杂质峰的面积增大，造成有关物质的量不准确。我们的经验是：注入一针溶剂，如果保留时间和峰形与样品溶液的峰形一致，则表示为溶剂峰，峰面积不能计入杂质峰。
2.3 其他干扰峰
2.3.1 在对某企业生产的吡拉西坦氯化钠注射液有关物质检验时，液相图谱在2分多钟时出现一个较大的吸收峰，如果按有关物质算远远超过了限度。但氯化钠本身为无机盐应该没有吸收，可是杂质峰又不可能那么大。为此我们用氯化钠注射液按同样浓度进样，结果色谱图上出现了相同保留时间的吸收峰。该峰究竟是由氯化钠产生的还是氯化钠中的杂质产生的还不能证实。我们对多个厂家的氯化钠注射液进样均有此吸收峰，所以建议在有关物质检查中增加氯化钠空白实验。
2.3.2 在用薄层色谱法检查烟酸占替诺有关物质时采用的为主成分自身对照法，样品通过展开显色后在主斑点下方有一较大的斑点，超出对照斑点很多倍，多次实验现象相同，怀疑此方法存在问题，请示了上级药品检验所和原标准起草单位，答复是此斑点是烟酸，是正常的。所以有些标准的不完善给我们检验者也带来了很多的麻烦。
2.4 药品标准中规定的保留时间不够由于有的药物与其有关物质分子结构的极性相差较大，因此在液相色谱分析中有关物质按规定的记录时间（为主峰保留时间的2倍），杂质峰没有完全出现，具体表现是当第一针走完后，进第二针的时候，峰形与第一针不同，当保留时间延长到3倍时，又出现一个吸收峰，如此按保留3倍多次进样，则峰形—致，说明标准中规定的保留时间延长2倍时间是不够的。液相色谱法检查有关物质时经常遇到的问题是主峰拖尾严重与杂质峰分离不开，理论板数不够，其原因之一是柱子本身柱效低或柱子用的时间久了，柱效降低了。当遇到这些问题时我们解决的办法首先是换柱子，如果发现柱子拖尾严重，在流动相内加入0.02%的三乙胺作为扫尾剂，如果分离不好，则调节流动相，降低有机相的比例。如发现是柱子本身问题可打开柱子检查是否有塌陷或柱头污染情况，如果有污染可挖去一部分，填上同型号填料，冲柱即可。
3 乙酰水杨酸制剂中游离水杨酸的检查
阿司匹林类药物为常用解热镇痛药，由于阿司匹林易分解为水杨酸和醋酸，而水杨酸对人体有一定的毒副作用，因此，阿司匹林及其制剂的质量标准中均有游离水杨酸的限度检查，标准中均采用比色法进行检查。此方法灵敏度底，目视误差较大。方法研究：乙酰水杨酸锌是某药厂生产的原料药，游离水杨酸也是采用比色法，我们提出是否用HPLC法测定其含量和游离水杨酸，经过多次试验，得到一个较可行的HPLC法。
3.1 方法：选择了最常用的C18柱，流动相为（6.8g磷酸二氢钾，加0.1mol/L氢氧化钾70ml溶解后，加水至850ml，用0.1mol/L氢氧化钾调节pH为6.3±0.1，加甲醇80ml，再加水1000m1）检测波长290nm，进样量20ul。取供试品相当于乙酰水杨酸锌300mg，加流动相使成100ml，滤过，滤液作为供试品溶液；另取水杨酸对照品15mg，加流动相使成200ml，取2ml加流动相稀释至50ml。
3.2 结果：如供试品溶液中有与对照品相同保留时间的吸收峰，其面积不得大于对照品峰面积。经过实验线性关系r=0.9999，加样回收率为99.5%，RSD=0.5%
3.3 讨论
3.3.1 由于乙酰水杨酸锌在酸性条件下不稳定，故选择的流动相和溶剂为中性。
3.3.2 水杨酸易溶于甲醇，所以选择流动相为溶剂。
3.3.3 通过对其他制剂的实验证明用此方法检查游离水杨酸分离效果良好，重现性好，专属性较强，结果准确。
参考文献
[1] 黄萍.1、芒果苷及其苷元的结构修饰和黄嘌呤氧化酶抑制活性的研究2、塞来昔布有关物质的合成[D].北京协和医学院，2013.
[2] 侯世兴.单唾液酸四己糖神经节苷脂的纯化及有关物质测定方法研究[D].重庆大学，2013.
[3] 曹佳佳.两种药物有效成分与有关物质的提取分离及含量测定研究[D].浙江工业大学，2013.
[4] 张明媛.三种化学药物中有关物质的分析方法研究[D].第二军医大学，2013.
[5] 卢德刚.HPLC法测定呋喃妥因栓有关物质[J].黑龙江科技信息，2012，34：57.
[6] 赵敏.盐酸洛美沙星原药中有关物质的HPLC测定[J].中国社区医师（医学专业），2013，04：206-207.
[7] 周红梅，卢福强.HPLC法测定维生素B_（12）滴眼液中的有关物质[J].黑龙江科技信息，2013，06：4.
关键词：HPLC；药品有关物；残留检测
【中图分类号】R453【文献标识码】 A【文章编号】1002-3763（2014）09-0109-021 关于药品中有关物质残留检查研究的一点建议：
1.1 有关物质检查常用的方法是主成分自身对照法和已知杂质对照品比较法。对于主成分自身对照法，采用此方法时确定的检测波长是否合理直接影响到方法的可行性，因此，检测波长的选择是方法学研究的重要内容。
1.2 我们认为一些药物采用HPLC主成分自身对照法检查有关物质时直接以主成分的最大吸收波长为检测波长不合理。
2 现行标准中遇到的问题
日常工作中我们常遇到的问题主要有：杂质峰和辅料峰不好界定；理论板数要求过高；关于溶剂峰；其它干扰；药品标准中规定的保留时间不够。
2.1 理论板数问题：例如：对乙酰氨基酚有关物质检查是用对氨基酚作杂质对照品，对氨基酚保留时间为6分钟，对乙酰氨基酚的保留时间为15分钟，两者分离度在10以上，但由于对乙酰氨基酚的进样量过大，所以理论板数达不到要求的5000，更换多支柱子仍达不到，但样品浓度在含量測定下时理论板数达6000以上。我们认为本法只测定对氨基酚，只要两者的分离度达到要求就可以，而样品峰的理论板数与测定无关。
2.2 关于溶剂峰：在有关物质检查时往往会出现溶剂峰，特别是低波长测定时溶剂峰更大，这样会使杂质峰的面积增大，造成有关物质的量不准确。我们的经验是：注入一针溶剂，如果保留时间和峰形与样品溶液的峰形一致，则表示为溶剂峰，峰面积不能计入杂质峰。
2.3 其他干扰峰
2.3.1 在对某企业生产的吡拉西坦氯化钠注射液有关物质检验时，液相图谱在2分多钟时出现一个较大的吸收峰，如果按有关物质算远远超过了限度。但氯化钠本身为无机盐应该没有吸收，可是杂质峰又不可能那么大。为此我们用氯化钠注射液按同样浓度进样，结果色谱图上出现了相同保留时间的吸收峰。该峰究竟是由氯化钠产生的还是氯化钠中的杂质产生的还不能证实。我们对多个厂家的氯化钠注射液进样均有此吸收峰，所以建议在有关物质检查中增加氯化钠空白实验。
2.3.2 在用薄层色谱法检查烟酸占替诺有关物质时采用的为主成分自身对照法，样品通过展开显色后在主斑点下方有一较大的斑点，超出对照斑点很多倍，多次实验现象相同，怀疑此方法存在问题，请示了上级药品检验所和原标准起草单位，答复是此斑点是烟酸，是正常的。所以有些标准的不完善给我们检验者也带来了很多的麻烦。
2.4 药品标准中规定的保留时间不够由于有的药物与其有关物质分子结构的极性相差较大，因此在液相色谱分析中有关物质按规定的记录时间（为主峰保留时间的2倍），杂质峰没有完全出现，具体表现是当第一针走完后，进第二针的时候，峰形与第一针不同，当保留时间延长到3倍时，又出现一个吸收峰，如此按保留3倍多次进样，则峰形—致，说明标准中规定的保留时间延长2倍时间是不够的。液相色谱法检查有关物质时经常遇到的问题是主峰拖尾严重与杂质峰分离不开，理论板数不够，其原因之一是柱子本身柱效低或柱子用的时间久了，柱效降低了。当遇到这些问题时我们解决的办法首先是换柱子，如果发现柱子拖尾严重，在流动相内加入0.02%的三乙胺作为扫尾剂，如果分离不好，则调节流动相，降低有机相的比例。如发现是柱子本身问题可打开柱子检查是否有塌陷或柱头污染情况，如果有污染可挖去一部分，填上同型号填料，冲柱即可。
3 乙酰水杨酸制剂中游离水杨酸的检查
阿司匹林类药物为常用解热镇痛药，由于阿司匹林易分解为水杨酸和醋酸，而水杨酸对人体有一定的毒副作用，因此，阿司匹林及其制剂的质量标准中均有游离水杨酸的限度检查，标准中均采用比色法进行检查。此方法灵敏度底，目视误差较大。方法研究：乙酰水杨酸锌是某药厂生产的原料药，游离水杨酸也是采用比色法，我们提出是否用HPLC法测定其含量和游离水杨酸，经过多次试验，得到一个较可行的HPLC法。
3.1 方法：选择了最常用的C18柱，流动相为（6.8g磷酸二氢钾，加0.1mol/L氢氧化钾70ml溶解后，加水至850ml，用0.1mol/L氢氧化钾调节pH为6.3±0.1，加甲醇80ml，再加水1000m1）检测波长290nm，进样量20ul。取供试品相当于乙酰水杨酸锌300mg，加流动相使成100ml，滤过，滤液作为供试品溶液；另取水杨酸对照品15mg，加流动相使成200ml，取2ml加流动相稀释至50ml。
3.2 结果：如供试品溶液中有与对照品相同保留时间的吸收峰，其面积不得大于对照品峰面积。经过实验线性关系r=0.9999，加样回收率为99.5%，RSD=0.5%
3.3 讨论
3.3.1 由于乙酰水杨酸锌在酸性条件下不稳定，故选择的流动相和溶剂为中性。
3.3.2 水杨酸易溶于甲醇，所以选择流动相为溶剂。
3.3.3 通过对其他制剂的实验证明用此方法检查游离水杨酸分离效果良好，重现性好，专属性较强，结果准确。
参考文献
[1] 黄萍.1、芒果苷及其苷元的结构修饰和黄嘌呤氧化酶抑制活性的研究2、塞来昔布有关物质的合成[D].北京协和医学院，2013.
[2] 侯世兴.单唾液酸四己糖神经节苷脂的纯化及有关物质测定方法研究[D].重庆大学，2013.
[3] 曹佳佳.两种药物有效成分与有关物质的提取分离及含量测定研究[D].浙江工业大学，2013.
[4] 张明媛.三种化学药物中有关物质的分析方法研究[D].第二军医大学，2013.
[5] 卢德刚.HPLC法测定呋喃妥因栓有关物质[J].黑龙江科技信息，2012，34：57.
[6] 赵敏.盐酸洛美沙星原药中有关物质的HPLC测定[J].中国社区医师（医学专业），2013，04：206-207.
[7] 周红梅，卢福强.HPLC法测定维生素B_（12）滴眼液中的有关物质[J].黑龙江科技信息，2013，06：4.